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C型肝炎ウイルスの感染初期過程に関与する宿主因子の探索

寻找参与丙型肝炎病毒早期感染过程的宿主因素

基本信息

批准号：
19659192
负责人：
脇田隆字
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659192/
关键词：
HCV 宿主因子感染実験ウイルス複製レセプター

项目摘要

これまでC型肝炎ウイルス(HCV)の研究は、実験室内で感染性ウイルスを用いた研究ができなかった。我々はJFH-1株を用いて、世界で初めて培養細胞においてHCVのウイルス培養に成功した。本研究では、この新規ウイルス培養系を用いてC型肝炎ウイルスの感染初期過程に関与する細胞性因子を探索した。感染感受性細胞の同定:肝細胞を中心にHCV感染感受性細胞を探索した。その結果、Huh7細胞に感染感受性があった。その他の肝細胞や肝臓以外の臓器由来細胞などに感染感受性は認められなかった。段階希釈したウイルス液をHuh7細胞に感染させたところ、低ウイルス量の感染では容量依存性に感染細胞数が増加するが、抗ウイルス量の感染では感染細胞数はプラトーとなり増加しなかった。Huh7細胞のクローニングと解析:上記結果から、Huh7細胞は感染感受性の異なるヘテロな細胞集団であることを想定し、Huh7細胞のクローニングを試みた。その結果70のクローン化細胞を樹立した。クローン化したHuh7細胞のHCV感染感受性、RNA複製能、宿主因子発現について解析した親細胞よりも高い感染感受性のもの、同等のもの、非常に低いか感受性のないものに分類された。クローン化した細胞のゲノム複製能はやはりクローンにより様々であったが、感染感受性とは一致しなかった。さらに、HCV感染過程に重要と考えられる宿主因子(CD81、SR-BI、LDLレセプター)の細胞表面での発現についてFACSにより解析した。興味深いことにCD81の細胞表面の発現の有無が感染感受性と全く一致した。他のSR-BI、LDLレセプターの発現の程度と感染感受性に関しては関連が見られなかった。そこで、様々な性質のクローン化細胞の遺伝子発現プロファイルを比較検討することによりウイルスの感染感受性やゲノム複製能に関与する宿主遺伝子の同定を現在試みている。

The study of hepatitis C virus (HCV) infection in laboratory was carried out. We successfully cultured HCV cells with JFH-1 strain. This study aims to explore the role of cellular factors in the early stages of hepatitis C infection by using new cell culture systems. Identification of infection-susceptible cells: the study of HCV infection-susceptible cells at the center of liver cells Results, Huh7 cells infection susceptibility. Other liver cells and organ-derived cells outside the liver are susceptible to infection. The number of infected cells increased with the increase of infection rate and infection rate. Huh7 cell culture analysis: The results above indicate that Huh7 cells have different susceptibility to infection. The results of the 70-year old cell culture are as follows: HCV infection susceptibility, RNA replicability, host factor development in Huh7 cells were analyzed by high susceptibility, equivalent susceptibility, and very low susceptibility. The ability to replicate in a cell is not limited to the susceptibility to infection. In addition, FACS analysis of host factors (CD81, SR-BI, LDL) and their expression on the cell surface is an important factor in HCV infection. The expression of CD81 on the cell surface and its susceptibility to infection were all consistent. The relationship between SR-BI, LDL and susceptibility to infection was discussed. A comparative study of the gene expression profile of the host cell with respect to the characteristics of the host cell and its susceptibility to infection and replication was conducted to determine the identity of the host gene.