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感染性C型肝炎ウイルス粒子による肝細胞への遺伝子デリバリーシステムの構築

使用传染性丙型肝炎病毒颗粒构建肝细胞基因递送系统

基本信息

批准号：
18015051
负责人：
脇田隆字
金额：
$ 7.17万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18015051/
关键词：
HCV ウイルス感染実験遺伝子導入肝細胞

项目摘要

遺伝子治療をおこなうためには標的とする細胞に効率よく遺伝子を送り込む技術を開発する必要がある。このためにウイルスベクターを利用した遺伝子導入法が開発されてきた。また,ウイルス性,アルコール性,代謝性の進行性肝疾患に起因する非代償性肝硬変に対して有効な治療法は肝移植しかない。一方肝細胞癌のうち多発性進行肝癌に対する治療成績は依然として満足できる物ではなく,有効な治療法の開発が必要である。我々はC型肝炎ウイルスの研究において感染性cDNAクローンから培養細胞でのウイルス培養に成功した。この技術を基本にして,組み換え型C型肝炎ウイルス粒子を作成し,肝細胞に特異的に遺伝子をデリバリーする方法の開発を試みた。感染性非増殖性ウイルスの作成:サブジェノミックレプリコン細胞に構造領域遺伝子を導入するとウイルス粒子が培養液中に分泌されることが明らかとなった。ウイルス粒子分泌にはコアからp7までの領域が必要だが,感染性ウイルス粒子の分泌にはNS2領域の発現が必須であるった。感染性非増殖性ウイルスの解析:作製したウイルス粒子は感染性はあるが伝搬性は無く,フォーカスアッセイによい,感染フォーカスは単一または2個の感染細胞からなっていた。また,この感染はCD81およびウイルス表面蛋白に対する抗体で抑制することができることから,HCV特異的なレセプターを介して感染していると考えられた。レポーター遺伝子の導入:感染性非増殖性ウイルスにパッケージングされるウイルスゲノムにはネオマイシン耐性遺伝子がコードされている。このウイルス粒子を細胞に感染させた後にG418の選択培養を行うと感染細胞はネオマイシン耐性遺伝子発現により生存した。この結果は感染性非増殖性ウイルスによる遺伝子導入が可能であることを示した。

In order to improve the rate of medical treatment, the rate of cell death is very high, and the rate is very high. It is necessary to make use of the sub-law to open a financial information system. The etiology of progressive liver disease is not congenial cirrhosis. There is a method of treatment for liver transplantation. One side of liver cancer is undergoing multiple treatment of liver cancer. After the treatment of liver cancer, it is still necessary to treat liver cancer. We studied hepatitis C virus infection, cDNA infection, cell culture, cell culture, and success. The basic technical skills were improved, hepatitis C virus particles were made into hepatitis C virus particles, and the liver cells were used to detect hepatitis C virus in the liver. The infectious non-reproductive disease is caused by the production of field cells and the secretion of bacteria in the culture solution of particles in the culture solution. The secretion of NS2 particles is very important in the field of infection, and it is necessary for the secretion of infectious particles. Analysis of infectious non-reproductive diseases: infectious particles were not infected, infectious particles were free, infection cells were infected, and 2 infected cells were infected at one time. CD81 infection, infection, surface protein, antibody inhibition, infection, antibody inhibition, infection, infection, The infection is non-reproductive, the child is infected, the child is not infected, and the child is infected. After the infection of particles and cells, G418 chose to make sure that the cells were infected and the cells were infected. The results showed that the infective non-gonadal disease was infected and the infection was detected.