权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ヒト骨髄間葉系幹細胞由来の不死化細胞とがん幹細胞

源自人骨髓间充质干细胞和癌症干细胞的永生化细胞

基本信息

批准号：
19659324
负责人：
檜山英三
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト骨髄30検体から間葉系幹細胞(hMSC)を分離し、培養、分化抑制因子LIF、bFGF添加で未分化状態で増殖を行った。またhMSC由来の不死化クローンhMSC-3、-4,-5,-6と、さらにhTERT(human telomerase reverse transcriptase)導入でテロメラーゼを強制発現した株hMSC-3h,-4h,-5h,-6h,を作成した。網羅的遺伝子発現解析では、未分化細胞ではゲノムの10%程度の遺伝子のみ発現し、分化とともに多くの遺伝子が発現した。一方、不死化細胞株、がん幹細胞株で有意に発現した遺伝子を200程度抽出し、定量PCRで有意な遺伝子12種を選別した。また、hMSCのテロメアは、約40kbと伸長し、テロメラーゼ活性はなく、テロメラーゼ非依存伸長機構(ALT)を有していた。また、hTERTを導入したhMSC-株はテロメア長、増殖能、形態学的変化も顕著な差はなく、通常のhMSCと同様に、脂肪細胞、骨芽細胞、筋肉細胞へ分化誘導しえた。また、分化誘導とともに、テロメア長が短縮することも確認した。しかし、NOD/SCIDマウスにhMSC細胞株、hTERT導入hMSC細胞株を接種すると、いずれも腫瘍を形成し、hTERT導入細胞株4株中2株で、浸潤、遠隔転移を認め明らかにがん化していた。以上からhMSCから得られた不死化細胞株、がん幹細胞株の可塑性が確認され、未分化な増殖状態に保つシグナルとして、Wntシグナルなど3経路が明らかになり、hTERTを導入によってさらに活性化する遺伝子から、不死化獲得機構、がん化の機構の解明が可能であり、その候補遺伝子を8種見出した。これらからhMSCの長期培養法による悪性転換の指標を検討中である。また、作製したがん幹細胞株は、Cancer stem cellのモデルとして今後の研究ツールとなった。

Mesenchymal stem cells (hMSCs) were isolated, cultured, and proliferated in an undifferentiated state by adding LIF and bFGF. hMSC-3,-4,-5,-6 and hTERT(human telomerase reverse transcriptase) were introduced into hMSC-3,-4,-5,-6 h after induction. The results showed that 10% of the undifferentiated cells were undifferentiated and undifferentiated, and most of the undifferentiated cells were undifferentiated. One side, immortal cell line, stem cell line, intentional detection of DNA, 200 degree extraction, quantitative PCR, intentional detection of DNA, 12 species selection The hMSC has about 40kb of elongation, activity, and independent elongation mechanism (ALT). hMSC-cell differentiation, proliferation, morphological differentiation, differentiation of normal hMSC-cells, adipocytes, osteoblasts, muscle cells The difference between the two is that they are different. hMSC cell lines and hTERT introduced hMSC cell lines were inoculated with NOD/SCID, and 2 of the 4 hTERT introduced cell lines were inoculated with NOD/SCID, and 2 of the 4 hTERT introduced hMSC cell lines were infiltrated, and 2 of the 4 hTERT introduced hMSC cell lines were isolated. 8 kinds of candidate genes were found in the above mentioned hMSC, including the identification of the plasticity of the immortal cell line, the preservation of the undifferentiated state of the stem cell line, and the introduction of the hTERT, the activation of the hTERT, the acquisition of the immortal mechanism, the interpretation of the hTERT mechanism, and the identification of the undifferentiated state. The long-term culture method of hMSC is discussed in this paper. Stem cell lines, Cancer stem cells and future research