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自己骨髄細胞移植による尿失禁治療

自体骨髓细胞移植治疗尿失禁

基本信息

批准号：
19659411
负责人：
杵渕芳明
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】腹圧性尿失禁に対して,近年骨格筋由来幹細胞移植が臨床応用されている。われわれは,ラットでの尿道括約筋障害モデルを作成するとともに,他の細胞源として,自己骨髄細胞移植が尿道括約筋の再生・機能の改善に寄与するかどうかを検証し,内因性尿道括約筋障害に対する治療法になりうるかを検討した。【方法】1. リタイヤ雌性SDラットを用いた。開腹後,尿道を全周性に機械的に剥離し,筋毒素であるcardiotoxinを投与することにより,尿道括約筋障害モデルを作成した。2. 事前に大腿骨または腸骨から骨髄細胞を採取・遠心分離し,培養した。培養細胞の性質は,flowcytometry,免疫染色により評価した。3. 括約筋障害術後7日目に,培養骨髄細胞を,同一個体の尿道括約筋周囲へ注入・移植した。一部にはGFP標識細胞を移植した。4. コントロールとして,開腹のみの群および括約筋障害術後に培地のみ注入した群(非移植群)を設定した。5. 移植後1〜12週まで,経時的に尿漏出圧,膀胱容量を測定した。6. 12週後に標本を採取し,免疫染色による評価を行った。尿道平滑筋についてはαSMA,横紋筋についてはskeletal myosin陽性領域を測定した。神経についてはPGP9.5染色により評価した。【結果】1.上述手技により,ラットの尿道括約筋障害モデルを作成することができた。2.ラットから骨髄細胞を採取,培養することができた。この際,培養細胞は筋細胞に分化することが示された。3.同一個体の尿道括約筋部へ移植された自己骨髄細胞は,同部へ生着し,横紋筋細胞および末梢神経に分化することが示された。4.対照群(非細胞移植群)に比べ,移植群では骨格筋,神経細胞数の優位な増加を認めた。5.尿漏出圧は,移植後に時間とともに回復傾向を示したが,非移植群と比べて有意な差は認められなかった。【結論】尿道損傷術後の機能回復のためには,骨髄細胞の移植手技や,移植細胞数について,更なる検討が必要と思われた。

[Objective] In recent years, stem cell transplantation from bone and tendon has become a clinical application for abdominal urinary incontinence. In order to improve the function and regeneration of urethral stricture by transplantation of bone marrow cells, the treatment of intrinsic urethral stricture is discussed. [Method] 1. Female SD After laparotomy, the urethra is mechanically dissected all around, and the cardiotoxin is injected into the urethra to form a tendon barrier. 2. Before the thigh bone, iliac bone cells were isolated and cultured remotely. The nature of cultured cells,flowcytometry, immunostaining and evaluation. 3. Seven days after surgery for urinary tract obstruction, cultured bone marrow cells were injected and transplanted into the peripheral urethra of the same individual. A part of GFP marker cells transplanted. 4. In addition, the number of patients undergoing surgery and the number of patients undergoing surgery (non-transplant group) are set. 5. 1 ~ 12 weeks after transplantation, urine leakage pressure and bladder capacity were measured. 6. After 12 weeks, the samples were collected and immunostained. Urethral smooth muscle αSMA, striated muscle skeletal myosin positive areas were determined. PGP9.5 staining is the most important part of the process. [Results] 1. The above-mentioned manual techniques were used to make the urethral contractile muscle barrier. 2. Bone marrow cells were taken and cultured. At the same time, the cultured cells were differentiated into muscle cells. 3. In the same individual, the striated tendon cells and the peripheral nerve cells were differentiated from each other. 4. Compared with the control group (non-cell transplant group), the transplant group has the advantage of bone and tendon, and the number of nerve cells has increased. 5. The urine leakage is different from that of the non-transplanted group. [Conclusion] The functional recovery after urethral injury is related to the transplantation technique of bone marrow cells, the number of transplanted cells, and the need for further investigation.