マウスES細胞を利用した尿路組織再生の試み

尝试使用小鼠 ES 细胞再生尿路组织

• 批准号: 16790911
• 负责人: 杵渕 芳明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790911/
• 关键词: ES細胞; 重層上皮; 尿路上皮; 間葉組織; 平滑筋; 尿路組織; 奇形腫; 間質組織

【目的】1)マウスES細胞を用いて,尿路組織(上皮・平滑筋)の誘導を試みる.2)培養組織を生体へ移植することにより,臨床への応用可能性を探る.【方法】マウスES細胞(129/sv strain)から,コニカルチューブを用いて胚様体(EB)を形成した.これを単層の組織培養用アテロコラーゲン膜上に接着させ,2〜4週間培養した.培養液の条件を変えることにより,重層上皮と間葉組織から成る2層構造をもった組織を誘導することができた.同組織をヌードマウスの皮下および腎被膜下に移植し,2週および4週間後に採取した.(1)培養組織について,免疫染色,ウェスタンブロット法,透過型電子顕微鏡,RT-PCR法にて評価した.(2)移植組織については,免疫染色を行った.(3)また,移植組織が奇形腫を形成しない条件についても検討した.【結果】(1)培養組織は,重層上皮と平滑筋細胞を含む間葉組織からなる2層構造を示した.上皮は,pancytokeratin, cytokeratin 8, 18に陽性で,内胚葉系への分化傾向を示すと思われた.また,間質組織には,αsmooth muscle actin(SMA)陽性細胞が高率に認められた.RT-PCRでは,各種平滑筋マーカー(αSMA, calponin, myosin)の発現を認めた.また,尿路上皮マーカーであるuroplakin(Upk)の発現も認めた.(2)移植した組織についても,一部にUpk3に染まる上皮様構造が確認された(3)分化誘導培地を用いることにより,ある程度奇形腫形成が抑制された.【結論】同方法により,ある程度分化した2層構造の組織を得ることができ,一部に尿路上皮の発現も認められた.また,分化誘導培地の使用や前処置を行うことにより,移植組織からの奇形腫形成も抑制できる可能性が示された.研究段階ではあるが,尿路や消化器系への応用可能性が示された.

【 objective 】 1) マ ウ ス を ES cells with い て, urinary tissue, smooth muscle (epithelium) induced を の try み る. 2) the training organization を raw body へ transplantation す る こ と に よ り, clinical へ の 応 possibility with を る. 【 method 】 マ ウ ス ES cells (129 / sv Strain) か ら, コ ニ カ ル チ ュ ー ブ を with い て embryo others body (EB) を form し た. こ れ を の 単 layer tissue culture with ア テ ロ コ ラ ー ゲ ン membrane に then さ せ, 2 ~ 4 weeks training し た. Culture conditions of の を - え る こ と に よ り, heavy layer epithelial と mesenchymal tissue か ら into る 2 layer structure を も っ た organization を induced す る こ と が で き た. With organization を ヌ ー ド マ ウ ス の subcutaneous お よ び し に transplantation under renal capsule, 2 weeks お よ び に taken after 4 weeks between し た. (1) training organization に つ い て, immune dyeing, ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト method, through electronic 顕 micro mirror, rt-pcr method に て review 価 し た. (2) the graft に つ い て は, immune dyeing line を っ た. (3) ま た, move Plant tissue が odd shape swollen を form し な い conditions に つ い て も beg し 検 た. 【 results 】 (1) training organization は, heavy layer epithelial と を smooth muscle cells contain む mesenchymal tissue か ら な る を 2 layer structure and shown し た. Epithelium youdaoplaceholder7,pancytokeratin, cytokeratin 8 18 に positive で, germ layer in へ の differentiation tendency を shown す と think わ れ た. ま た, interstitial tissue に は and alpha smooth muscle actin (SMA) positive cells が high rate に recognize め ら れ た. Rt-pcr で は, all kinds of smooth muscle マ ー カ ー (alpha SMA, calponin, Myosin) の 発 を now recognize め た. ま た, urothelial マ ー カ ー で あ る uroplakin (Upk) の 発 も now recognize め た. (2) transplantation し た organization に つ い て も, a に Upk3 に dye ま る epithelial others in tectonic が confirm さ れ た (3) differentiation inducing the petty を with い る こ と に よ り, あ る degree form が inhibit さ odd shape is swollen れ た. 【 conclusion 】 with method に よ り, あ る degree differentiation し た 2 layer structure の group を る こ と が で き, a に urothelial の 発 も now recognize め ら れ た. ま た, differentiation inducing the petty の line using や 処 buy を う こ と に よ り, transplants か ら の odd shape swollen formation も inhibit で き が る possibility in さ れ た. The study stage is で で あるが あるが, and the urinary tract や digestive system へ and 応 use possibility が shows された.