悪性リンパ腫関連網膜症患者血清が認識する網膜特異抗原の同定と発症機構に関する研究

恶性淋巴瘤相关视网膜病变患者血清中视网膜特异性抗原的鉴定及发病机制研究

• 批准号: 19659448
• 负责人: 菊池 孝信
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659448/
• 关键词: 眼関連網膜症; 悪性リンパ腫; 自己免疫疾患; 癌関連網膜症

悪性リンパ腫関連網膜症(Lymphoma-associated Retinopathy: LAR)の患者血清中には網膜タンパクに対する抗体が存在することから、癌関連網膜症(CAR)と同様に自己免疫性疾患のひとつと考えられている。本研究課題の目的は、1)LARの患者血清が認識する網膜特異抗原タンパクを単離・同定し、2)そのタンパクの生理機能の解析、および3)網膜特異抗原に対する自己抗体が網膜組織・視機能に与える障害の有無・程度について電気生理学および組織形態学的な解析を行い、LARの発症機構および病態を分子レベルで解明することにある。本年度は以下の研究を実施した。(1) マウス網膜から核タンパク質の抽出法の検討亜鉛固定したマウス網膜のパラフィン切片を用いて免疫染色をしたところ、患者血清が認識する抗原タンパク質が神経節細胞層および内顆粒層と外顆粒層の一部の細胞核に局在することから、マウス網膜から核タンパク質の抽出を行った。QIAGEN社のQproteome Cell Compartment kitを用いて、マウス網膜のタンパク質を大まかに細胞基質、膜、核、細胞骨格の四つに分画した。これらのタンパク質をウェスタンブロット分析したところ、120および107kDaの抗原タンパクは核画分に、54kDaの抗原タンパクは細胞膜画分に存在することが明らかとなった。(2) アフィニティ抗体カラムの作製抗原タンパクの同定を行うために、固定化抗体カラムの作製を行った。プロテインA-セファロースに患者血清を加え、血清中のIgGをプロテインAに結合させた。良く洗浄した後、架橋剤としてDMPを用いてIGgを固定化した。この固定化カラムと上記の実験で調整した網膜核画分のタンパクを用いて抗原蛋白質の分離およびLC-MSによるプロテオミクス解析を行っている。

In the sera of patients with sex-related network disease (Lymphoma-associated Retinopathy: LAR), there are two types of antibodies in the sera of patients with sex-related network disease (CAR) and cancer-related network disease (CAR). The objectives of this study are as follows: 1) the serum levels of membrane specific antigens in patients with LAR were identified, 2) the physiological mechanisms of specific antigens were analyzed, and 3) the network specific antigens were linked to self-antibodies. The LAR disease mechanism examines the molecular markers of the disease and explains the symptoms of the disease. The following studies will be conducted this year. (1) the method of cell nuclear extraction was used in this study. The immunostaining was used to make the section of the fixed network. The patient's serum was stained with immunostaining. The patient's serum was stained with immunostaining. The patient's serum was stained with immunostaining. QIAGEN Qproteome Cell Compartment kit uses four different cell lines: cell base, membrane, nucleus, and cell bone lattice. There is a lot of evidence in the analysis of 107kDa antigen, 54kDa antigen, cell membrane painting and cell membrane painting. (2) the antibody was used as the antigen, and the immobilized antibody was used as the antigen. The serum and IgG levels of the patients were significantly higher than those of the control group. After washing, the DMP is immobilized with the IGg. The immobilization system is used to analyze the whole network Envelope Nuclear Picture system. The LC-MS proteins are separated from each other by using the antigen protein.