权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

網膜色素上皮と神経網膜との相互作用に関する研究・網膜色素上皮細胞側からの分子的アプロ

视网膜色素上皮与神经视网膜相互作用的研究/从视网膜色素上皮细胞侧进行分子途径

基本信息

批准号：
02454402
负责人：
岩城正佳
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

網膜色素上皮細胞と神経網膜との相互作用を司る分子として、ニワトリ網膜色素上皮に特異的に発現する遺伝子(pP344)を候補として考えて解析を進めてきた。組織プラスミノーゲンアクチベーターは網膜血管新生を促進すると報告されている。この遺伝子は、セリンプロテアーゼインヒビターとのホモロジーが非常に高く、同様な二次構造をとれるので、その一つである組織プラスミノーゲンアクチベーターの活性を阻害し、血管新生を抑制すると予想し、ウサギ角膜を用いて調べた。pP344を発現ベクター(pMIW)に組み込み、マウス線維芽細胞(Ltk-cell)にトランセフェクションして、この遺伝子産物を発現させた。その結果、この遺伝子産物はコントロールと比較して、新生血管阻害作用に関しては全く差異が認められなかった。細胞内分布及び発生過程における発現とその様式を明らかにするために、この遺伝子産物に対する抗体を作成することが妥当と考えて試みている。抗原は、精製等の有利性から、大腸菌を用いた融合蛋白質での免疫を選んだ。制限酵素部位を利用して、数個のcDNA断片をpGEX-2T/3Xに導入し、Glutathion-S-transferaseとの融合蛋白質を作成した。ヘパリンカラムで精製した後にマウスに免疫し、それらの抗体については現在検索中である。更に、色素上皮細胞と神経網膜との相互作用に関わるpP344以外の分子を探索するために、ニワトリ網膜色素上皮細胞そのものに対するモノクローナル抗体を作成した。5種類の色素上皮細胞に特異的に反応する抗体が得られた。そのうちの一つは、色素上皮細胞細胞質及び視細胞細胞膜を特異的に染色している。この抗体の認識する抗原は、色素上皮と神径網膜間のmodulationの機能を有すると考えて解析を進めた。抗原を同定するために、網膜色素上皮細胞のcDNAライブラリーを発現ベクターであるlambda gtllを用いて0.7kbと0.9kbの陽性クローンを得た。それらの遺伝子については、現在、解析を行っている。

Network pigment epithelium (pP344) phenotype analysis was conducted to analyze the molecular and molecular features of the network pigment epithelium (RPE). The organization is responsible for the promotion of network neovascularization and the promotion of network angiogenesis. In the first place, the tissue was used to detect the activity of anti-angiogenesis, anti-angiogenesis and anti-angiogenesis. The pP344 has been shown to be sensitive (pMIW), Ltk-cell (bud cell), and sub-cell (Ltk-cell). The results were compared with each other, and the inhibitory effect of neovascularization was not as good as that of the whole blood vessel. The intracellular distribution and the process of pregnancy are known to be in the form of antigens, antibodies, antibodies, and so on. Antigens, spermatozoa and other beneficial bacteria were used to immunize the fusion protein. The enzyme-limiting site was constructed by restriction enzyme, several cDNA fragments, pGEX-2T/3X fragments, and Glutathion-S-transferase fusion protein. In the future, you will be immunized and the antibody will be immunized. Now you are in the middle of the rope. Pigment epithelium, cell membrane interaction, membrane interaction, pP344, molecular exploration, membrane pigment epithelial cell interaction, cell membrane interaction, membrane interaction, membrane interaction, (5) the anti-tumor antibodies of pigment epithelium cells were not detected. The specific staining of the membrane of pigment epithelial cells, pigment epithelial cells and pigment epithelial cells was detected. The antibody antibody can recognize the antigen and pigment epithelium, and the internetwork modulation can be used to analyze and analyze the antigen. The antigens were the same as those of the membrane pigment epithelial cells (cDNA). The results showed that the 0.7kb 0.9kb was successfully used in lambda gtll. Please do not know if you are going to have a problem, now, and parse the line.