Multi time-resolved spectroscopic analysis on molecular mechanisms of steroid hormone synthesis in adrenal cortex.

肾上腺皮质类固醇激素合成分子机制的多时间分辨光谱分析。

基本信息

  • 批准号:
    05452403
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 4.48万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
  • 财政年份:
    1993
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1993 至 1994
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

ACTH,ATP or angiotensin II was used to stimulate the steroidogenesis. In a single adrenocortical fasciculata cell, calcium signal was observed for all stmuli examined. In all cases, we found the co-exsitence of Ca-signaling cells and non-Ca-signaling cells. Multiple imaging of calcium signal and enzyme distribution within a single cell revealed that a Ca signaling cell did not contain 3beta-hydroxysteroid dehydrogenase and cytochrome P450scc and P450c21, implying that a Ca-signaling cell does not synthesize steroid hormones. On the other hand, non-Ca-signaling cell contained all these enzymes, indicating that the non-Ca-signaling cell is a steroidogenic cell. With a confocal microscope, the increase of calcium concentration was also observed in nucleus.We succeeded to label adrenodoxin (ADX) and adrenodoxin reductase (ADR) with phosphorescent probes without decreasing the electron transfer activity. Protein-protein interactions were investigated between ADX and P450scc and between ADR and P450scc by measuring time-resolved phosphorescence anisotropy. The anistropy measurements revealed the formation of ternery association consisting of P450scc, ADX and ADR.
用促肾上腺皮质激素、三磷酸腺苷或血管紧张素Ⅱ刺激类固醇激素的合成。在单个肾上腺皮质束状细胞中,所有受检者的肾上腺皮质束细胞均观察到钙信号。在所有的情况下,我们发现钙信号细胞和非钙信号细胞共存。钙信号和酶在单个细胞内分布的多重成像显示,钙信号细胞不含有3β-羟基类固醇脱氢酶和细胞色素P450scc和P450c21,这意味着钙信号细胞不合成类固醇激素。另一方面,非钙信号转导细胞含有所有这些酶,表明非钙信号转导细胞是类固醇合成细胞。在共聚焦显微镜下,也观察到细胞核内钙离子浓度的增加。我们成功地用磷光探针标记了肾上腺素(ADX)和肾上腺素还原酶(ADR),而不降低电子转移活性。通过测量时间分辨磷光各向异性,研究了ADX与P450scc和ADR与P450scc之间的蛋白质-蛋白质相互作用。各向异性测量表明,P450scc、ADX和ADR形成了三者之间的缔合。

项目成果

期刊论文数量(24)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Ohta, Y.: ""Dynamic Topology and Electron Transfer Interactions of Microsomal Cytochrome P450 in Liver and Adrenal Cortex : Protein Rotation Study"" Cytochrome P-450, Biochemistry, Biophysics, and Molecular Biology. 889-892 (1994)
Ohta, Y.:“肝脏和肾上腺皮质中微粒体细胞色素 P450 的动态拓扑和电子转移相互作用:蛋白质旋转研究”细胞色素 P-450、生物化学、生物物理学和分子生物学。
  • DOI:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Ohta, Y.: ""Rotation and Membrone Topology of Genetically Expressed Methylchelanthrene-inducible Cytochrome P-450IA1 Lacking the N-terminal Hydrophobic Segment in Yeast Microsomes."" J.Biol.Chem.269. 15597-15600 (1994)
Ohta, Y.:“酵母微粒体中遗传表达的甲基螯蒽诱导型细胞色素 P-450IA1 的旋转和膜拓扑结构缺乏 N 末端疏水性片段。”J.Biol.Chem.269。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Kawato, S.: ""Protein Motion of Cytochrome P-450 in Membranes and Cellular Response and Signaling"" Protein, Nucleic Acid and Enzyme. 40. 43-51 (1995)
Kawato, S.:“细胞色素 P-450 在膜中的蛋白质运动以及细胞反应和信号传导”蛋白质、核酸和酶。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
S.Kominami: "Membrane Topology of Bovine Adrenocortical Cytochrome P-450_<C21>:Structural Studies by Trypsin Digestion in Vesicle Membranes" Biochemistry. 32. 12935-12940 (1993)
S.Kominami:“牛肾上腺皮质细胞色素 P-450_<C21> 的膜拓扑:囊泡膜中胰蛋白酶消化的结构研究”生物化学。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Y.Ohta: "Rotation and Membrane Topology of Genetically Expressed Methylcholanthrene-inducible Cytochrome P-450IA1 Lacking the N-terminal Hydrophobic Segment in Yeost Microsomes" J.Biol.Chem.(in press).
Y.Ohta:“在酵母微粒体中遗传表达的甲基胆蒽诱导细胞色素 P-450IA1 缺乏 N 末端疏水片段的旋转和膜拓扑”J.Biol.Chem.(出版中)。
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知道了