蛋白質の分泌生産に対する折りたたみ酵素の役割

折叠酶在蛋白质分泌生产中的作用

• 批准号: 05660387
• 负责人: 鵜高 重三
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05660387/
• 关键词: 蛋白質の折りたたみ酵素; 蛋白質の分泌生産; ジスルフィド結合生成酵素

Bacillus brevisを宿主に用いる蛋白質分泌生産系によって、種々の有用蛋白質を生物活性を有する形で効率よく生産することができる。分泌生産されたポリペプチドが正しい立体構造を持つ蛋白質を形成するために作用している2種類の折りたたみに関する酵素の性質を明らかにしようとした。大腸菌のジスルフィド結合生成酵素(DSB)の遺伝子の欠失を相補するようなB.brevisの染色体DNA断片をクローン化し、B.brevisのDSB遺伝子を同定して塩基配列を決定した。そのアミノ酸配列中にプロテインジスルフィドイソメラーゼやチオレドキシンなどの活性中心と考えられている配列と類似した配列が存在していた。本遺伝子を多コピープラスミドにのせB.brevisによる大量発現を行い、培養上清からDSBを分離・精製した。この酵素はインスリンの還元反応や還元RNaseより活性化反応を触媒した。精製したDSBを抗原として作製した抗体を用い、アルカリ性フォスファターゼや上皮増殖因子の分泌後のジスルフィド結合の生成反応を検討中である。ポリペプチドの折れ曲がりに関するペプチジルプロリルシストランスイソメラーゼの遺伝子をB.brevisの染色体よりクローン化し、その遺伝子構造を検討中である。

Bacillus brevis is a host protein secretion system, species and useful protein production system. The production of protein is very important. E. coli DNA binding enzyme (DSB) gene deletion complement, B.brevis chromosome DNA fragment transformation, B. brevis DSB gene synchronization and gene alignment determination. The active center of the acid sequence and the similar sequence exist. This gene is produced in large quantities in the culture supernatant, separated and refined. This enzyme is called a catalytic enzyme. The purification of DSB antigen and the production of antibodies are discussed in the following ways: The chromosome structure of B.brevis is discussed in detail.