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新しい微生物探索系の理論的構築

新型微生物检测体系的理论构建

基本信息

批准号：
63616003
负责人：
鵜高重三
金额：
$ 7.04万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

1.蛋白質を効率よく生産する真核微生物を探索した結果、糸状菌Trichoderma virideが得られ、本菌を宿主に用いるために菌体外プロテアーゼ欠損変異株を分離した。本菌における高発現・分泌ベクターを構築する目的で、本菌が多量に分泌するセロビオヒドロラーゼの遺伝子をクローン化し、その塩基配列を決定した。2.解糖系酵素の阻害剤として発見したコニンギン酸はグリセロフアルデヒド-3リン酸脱水素酵素(G3PDH)の活性中心のシステイン残基と結合して本酵素を不可逆的に阻害する。活性中心のペプチド断片を分離して分析した結果、Cys^<149>にコニンギン酸が結合することを明らかにした。また、本阻害剤を生産する糸状菌には2種類のG3PDHの存在を示した。3.プロテアーゼ阻害剤を微生物探索に利用することによって新規な耐熱性酸性プロテアーゼを発見した。本酵素は疎水性アミノ酸含量が極めて高く、Leu-Tyr間を特異的に切断した。この結果に基づき、インスリンを用いて特異性の高いプロテアーゼの新しい探索法を開発した。また、トレハラーゼの阻害剤を発見し、昆虫の駆除に役立つ可能性を示した。4.脂質代謝に関与する酵素の阻害剤を動物培養細胞や微生物を利用して探索し、トリアシンやアテペニン等を発見した。アテペニンはコレステロールエステル合成を阻害し同時にATP産生系を強く阻害した。1233AはVero細胞を用いてメバロン酸代謝拮抗剤として見出された。5.酵母の細胞増殖と密接な関連をもつグリオキサールの代謝経路を明らかにし、その反応阻害物質から強力な増殖制御物質(抗がん剤としても期待される)の探索法を構築した。本代謝に関連する遺伝子をクローン化し、塩基配列決定によって遺伝子の解析を行い、ジャンボ酵母の育種に成功した。

1. Eukaryotic microorganism production efficiency was investigated, and Trichoderma viride was isolated from host cells. The aim of this bacterium is to construct a high level of production and secretion, to determine the amount of production and secretion, and to determine the gene sequence. 2. The inhibition of glycophytic enzymes occurs when the enzyme binds to the active site of glycophytic acid dehydratase (G3PDH), causing irreversible inhibition of the enzyme. The results of the analysis of the active center fragment were as follows:<149>The presence of two species of G3PDH in the production of this inhibitor is indicated. 3. The new method of microbial exploration and utilization of heat resistance and acidity The enzyme has a high content of water and acid, and a specific cut-off between Leu-Tyr. The results of this study are based on the discovery of a novel method for the identification of highly specific species. It is possible to detect the presence of insects and to detect the presence of insects 4. Lipid metabolism related to enzyme inhibition, animal culture cells and microbial utilization, exploration and development of lipid metabolism The ATP production system is strongly inhibited. 1233A was used in Vero cells as an inhibitor of acid metabolism. 5. A method for exploring the relationship between cell proliferation and cell adhesion in yeast is proposed. This metabolic correlation indicates that gene sequencing and gene alignment determination are successful in yeast breeding.