ヒト赤血球タイプ2Aプロテインホスファターゼの活性調節機構の研究

人红细胞2A型蛋白磷酸酶活性调节机制研究

• 批准号: 05670142
• 负责人: 碓井 裕史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670142/
• 关键词: プロテインホスファターゼ; タイプ2Aホスファターゼ; 赤血球; リン酸化・脱リン酸化; A-キナーゼ; C-キナーゼ; 脱リン酸化酵素; 酵素サブユニットの再構成

ヒト赤血球に、当教室で新たに見い出したタイプ2Aプロテインホスファターゼはα_1β_1δ_1のサブユニット構造を持ち、α(34kDa)が触媒サブユニット、β(63kDa)とδ(74kDa)が調節サブユニットである。本年度は74kDaδサブユニットの機能解析のための基礎的実験を重点的に行った。純化したα_1β_1δ_1からδとα_1β_1をヘパリン・セファローズカラムを用いて分離した。δとα_1β_1を0.5M NaCl存在下で混合し、α_1β_1δ_1とα_1β_1を完全に分離し得る条件でスーパーデラックス200のゲル濾過を行うと、一部α_1β_1δ_1が再構成された。一方、δはA-キナーゼまたはC-キナーゼでリン酸化されることを当教室で明らかにしているので、δとα_1β_1の結合に及ぼすδのリン酸化の影響を見た。その結果、A-キナーゼによるδのリン酸化が、δのα_1β_1への結合を促進することを見い出した。現在、再構成されたα_1β_1δ_1の性質を詳細に調べている。他方、δの組織分布やcDNAクローニングのために、δに対する抗体を作製した。上述の方法で単離したδをリビ・アジュバンドシステムを用いてマウスの腹腔に投与し、δに特異的な抗体を得た。この抗体はラットの70〜72kDaのタンパク質と特異的に反応する。ウエスタンブロット法で、これらのタンパク質の組織、細胞内分布を解析中である。一方、この抗体を用いてヒト骨髄cDNAライブラリーからこの抗体と反応するタンパク部分に対応するDNA断片を含むクローンをスクリーニング中である。δのcDNAのクローニングによる一次構造の決定、δのcDNAをプローブとしたノーザンブロット法によるδのmRNAの組織分布、δとα_1β_1の解離、再構成によるδのリン酸化の意義を明らかにし、δの機能を解明する。

The structure of red blood cells, α (34 kDa), β (63 kDa), δ(74 kDa), α (34 kDa), α (63 kDa), α (74 kDa), β (74 kDa), α(34kDa), α (63 kDa), β (74 kDa), α (63 kDa), β (74 kDa), β(63kDa), β(63kDa), β (74 kDa), β (74kDa), β(63kDa), β (74kDa), β(63kDa), β (74kDa This year, the 74kDaδPurified α_1 β_1 δ_ In the presence of 0.5M NaCl, δ ~ α_1β_1 is mixed and α_1 β_1 δ_1 ~ α_1 β_1 is completely separated. The effect of the combination of α_1 β_1 and δ_1 on the acidification of A square, δ_1 α_1β_ The results show that the A-1 β- Now, the properties of α_1β_1δ_1 are adjusted in detail. Other, delta tissue distribution, cDNA library, delta antibody control The method described above can be used to generate antibodies specific to the liver. The antibody has a 70 - 72kDa protein and a specific antibody. The tissue and intracellular distribution of the protein were analyzed by the method of protein analysis. On the one hand, this antibody is used to amplify the cDNA sequence, and the DNA fragments that are targeted by the antibody and the anti-DNA portion can be found in the library. The determination of the primary structure of δ cDNA, the tissue distribution of δ mRNA, the dissociation and recombination of δ α_1β_1, and the function of δ are discussed.