プロテインホスファターゼ2Aの74KDa調節サブユニットδの構造と機能

蛋白磷酸酶2A 74KDa调节亚基δ的结构和功能

• 批准号: 07680652
• 负责人: 碓井 裕史
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680652/
• 关键词: プロテインホスファターゼ2A; 蛋白質脱リン酸化; ヒト赤血球; 74kDaサブユニット; cDNAクローニング; 核移行シグナル; 組織分布; 解離・再構成

1.ヒト赤血球サイトゾルより精製した分子量180,000のプロテインホスファターゼ2Aは,34kDaの触媒サブユニットαと63および74kDaの調節サブユニットβ,δを各1分子ずつ含有する。74kDaδサブユニットの部分アミノ酸配列を決定し,ヒト大脳皮質および骨髄cDNAライブラリーよりδサブユニットのcDNAを単離した。このcDNAは570残基のアミノ酸より構成される分子量66,138の蛋白質をコードしており,大腸菌に発現させるとδサブユニット特異抗体と反応する約74kDaの蛋白質が検出された。推定される1次構造にはAキナーゼおよびCキナーゼによるリン酸化コンセンサス配列,核移行シグナル,プロリンリッチ領域,プロリン・グルタミンくり返し配列が認められた。δサブユニットのmRNAは約2.9kbで成熟ラットの調べた全ての組織(脳,心臓,肺,肝臓,脾臓,腎臓,腸,精巣,骨格筋)で検出された。:2.成熟ラットにおけるδサブユニットの組織分布をウエスタンブロット法で調べた。赤血球,脳,肺,精巣,副腎,心臓,脾臓,腎臓,肝臓のサイトゾルにδサブユニット特異抗体と反応する72kDa蛋白質が検出され,この内,脳における含量が最も多かった。骨格筋,腸ではほとんど検出されなかった。3.δサブユニットの機能をホロ酵素α_1β_1δ_1の解離,再構成により解析した。部分精製したα_1β_1δ_1をヘパリン-セファロースカラムを用いてα_1β_1とδに分離した。両者を0.4M塩化ナトリウム存在下で氷中で混和すると,ホロ酵素が再構成された。各種リン酸化基質に対するα_1β_1のホスファターゼ活性はδが結合することにより20-64%抑制され,α_1β_1およびα_1β_1δ_1の分子活性から推定されたδの機能を裏付けた。

1. ヒ ト red blood corpuscle サ イ ト ゾ ル よ り refined し た molecular weight 180000 の プ ロ テ イ ン ホ ス フ ァ タ ー ゼ 2 a は, 34 kda の catalyst サ ブ ユ ニ ッ ト alpha と 63 お よ び 74 kda の adjust サ ブ ユ ニ ッ ト beta, and delta 1 molecular ず を つ contains す る. 74 kda delta サ ブ ユ ニ ッ ト の part ア ミ ノ acid with column を し decision, ヒ ト big 脳 cortex お よ び bone marrow cDNA ラ イ ブ ラ リ ー よ り delta サ ブ ユ ニ ッ ト の cDNA を 単 from し た. こ の cDNA は 570 residues の ア ミ ノ acid よ り constitute さ れ る 66138 の protein molecular weight を コ ー ド し て お り, coliform に 発 now さ せ る と delta サ ブ ユ ニ ッ と ト specific antibodies against 応 す る about 74 kda protein の が 検 out さ れ た. Presumption さ れ る one construct に は A キ ナ ー ゼ お よ び C キ ナ ー ゼ に よ る リ ン acidification コ ン セ ン サ ス match column, nuclear migration シ グ ナ ル, プ ロ リ ン リ ッ チ field, プ ロ リ ン · グ ル タ ミ ン く り return し match column が recognize め ら れ た. Delta サ ブ ユ ニ ッ ト の mRNA は about 2.9 KB で mature ラ ッ ト の adjustable べ た full て の organization (脳, a routine heart, lung, liver is crucial, splenic, renal viscera, bowel, fine 巣, skeletal muscle) で 検 out さ れ た. 2. Mature ラットにおけるδサブユニット <s:1> tissue distribution をウエスタ ブロット ブロット method で adjustment べた. Red blood cell, 脳, lungs, 巣, adrenal gland, heart is crucial, splenic, kidney is crucial, crucial liver の サ イ ト ゾ ル に delta サ ブ ユ ニ ッ と ト specific antibodies against 応 す る 72 kda protein が 検 out さ れ, こ の, 脳 に お け が る content more than the most も か っ た. The bones and tendons, the intestines で ほとん ほとん 検 検 されな った った. 3. The functional をホロ enzyme α_1β_1δ_1 of δサブユニット dissociates and then forms によ to analyze た. Partially refined た たα_1β_1δ_1をヘパリ セファロ -セファロ スカラムを スカラムを separated by て てα_1β_1とδに た. The two are を0.4M salted ナトリウム present in で氷 で mixed すると, and the ホロ enzyme が is further formed into された. Various リ ン acidification matrix に す seaborne る alpha _1 beta _1 の ホ ス フ ァ タ ー ゼ active は delta が combining す る こ と に よ り 20-64% inhibition さ れ, alpha _1 beta _1 お よ び alpha _1 beta _1 delta _1 の molecular activity か ら presumption さ れ た delta の function in pay け を た.

项目成果

Osamu Tanabe: "Molecular cloning of a 74-kDa regulatory subunit(B″ or δ)of human protein phosphatase 2A" FEBS Letters. 379. 107-111 (1996)

Osamu Tanabe：“人蛋白磷酸酶 2A 74 kDa 调节亚基（B”或 δ）的分子克隆”FEBS Letters 379. 107-111 (1996)。