74kDaサブユニットを持つ新しいプロテインホスファタ-ゼの活性調節機構の研究

74kDa亚基新型蛋白磷酸酶活性调控机制研究

基本信息

批准号：
02680160
负责人：
碓井裕史
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒト赤血球サイトゾ-ル画分より精製したホスファタ-ゼIはタイプ2Aに属し,その分子量は180,000で、34kDaの触媒サブユニットαと63及び74kDaの調節サブユニットβ,δを各1分子ずつ含有している。cAMP依存性プロテインキナ-ゼ(Aキナ-ゼ)及びプロテインキナ-ゼC(Cキナ-ゼ)により、ホスファタ-ゼIの74kDa δサブユニットのセリン残基が定量的にリン酸化された。このリン酸化反応におけるホスファタ-ゼIに対するKmは、Aキナ-ゼで0.27μM、Cキナ-ゼで0.15μMで赤血球内の同酵素の推定濃度(0.2μM)にほぼ等しい。2.ホスホリラ-ゼキナ-ゼ,Ca^<2+>・カルモデュリン依存性プロテインキナ-ゼII,ミオシン軽鎖キナ-ゼ,cGMP依存性プロテインキナ-ゼ及びカゼインキナ-ゼIによるδサブユニットのリン酸化は認められなかった。3.リン酸化されたδサブユニットのトリプシン消化ペプチドの比較により、A及びCキナ-ゼに共通のリン酸化部位と、Cキナ-ゼに特有なリン酸化部位が認められた。4.Aキナ-ゼあるいはCキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化により、リン酸化H1ヒストンに対する脱リン酸活性は20ー40%上昇した。一方、リン酸化ミオシン軽鎖に対する脱リン酸活性は、Cキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化で50%促進されたが、Aキナ-ゼによるリン酸化では20%抑制された。異なるキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化が、異なる活性制御を行なうことが示唆された。

1。从人的红细胞细胞胞浆液级分纯化的磷酸酶属于2A型，分子量为180,000，含有一个分子，每个分子均催化亚基α和一个分子为63和74 kDa调节性亚基β和δ。 cAMP-dependent protein kinase (A quinase) and protein kinase C (C quinase) quantitatively phosphorylated the serine residues of the 74 kDa delta subunit of phosphatase I. The Km for phosphatase I in this phosphorylation reaction was 0.27 μM for A quinase and 0.15 μM for C quinase, approximately equal to the estimated concentration of the enzyme in红细胞（0.2μm）。 2。通过磷酸化酶酶，Ca^<2+>钙调蛋白依赖性蛋白激酶II，肌球蛋白轻链激酶，CGMP依赖性蛋白激酶和酪蛋白激酶I的磷酸化亚基没有磷酸化。 3。磷酸化δ亚基的胰蛋白酶消化肽的比较表明，A和C Quinase的常见磷酸化位点以及C Quinase的独特磷酸化位点。 4。通过A-或C Quinass对δ亚基的磷酸化增加了磷酸盐对磷酸化的H1组蛋白的脱磷酸化活性增加了20-40％。另一方面，针对磷酸化的肌球蛋白光链的去磷酸盐活性通过C Quinase磷酸化而加速了50％，但通过喹啉酶通过磷酸化酶抑制20％。据认为，不同激酶对δ亚基的磷酸化会导致不同的活性控制。