74kDaサブユニットを持つ新しいプロテインホスファタ-ゼの活性調節機構の研究

74kDa亚基新型蛋白磷酸酶活性调控机制研究

• 批准号: 02680160
• 负责人: 碓井 裕史
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02680160/
• 关键词: プロテインホスファタ-ゼ; ヒト赤血球; 蛋白質脱リン酸化; 蛋白質リン酸化; 酵素活性制御; cAMP依存性プロテインキナ-ゼ; プロテインキナ-ゼC; 74kDaサブユニット

1.ヒト赤血球サイトゾ-ル画分より精製したホスファタ-ゼIはタイプ2Aに属し,その分子量は180,000で、34kDaの触媒サブユニットαと63及び74kDaの調節サブユニットβ,δを各1分子ずつ含有している。cAMP依存性プロテインキナ-ゼ(Aキナ-ゼ)及びプロテインキナ-ゼC(Cキナ-ゼ)により、ホスファタ-ゼIの74kDa δサブユニットのセリン残基が定量的にリン酸化された。このリン酸化反応におけるホスファタ-ゼIに対するKmは、Aキナ-ゼで0.27μM、Cキナ-ゼで0.15μMで赤血球内の同酵素の推定濃度(0.2μM)にほぼ等しい。2.ホスホリラ-ゼキナ-ゼ,Ca^<2+>・カルモデュリン依存性プロテインキナ-ゼII,ミオシン軽鎖キナ-ゼ,cGMP依存性プロテインキナ-ゼ及びカゼインキナ-ゼIによるδサブユニットのリン酸化は認められなかった。3.リン酸化されたδサブユニットのトリプシン消化ペプチドの比較により、A及びCキナ-ゼに共通のリン酸化部位と、Cキナ-ゼに特有なリン酸化部位が認められた。4.Aキナ-ゼあるいはCキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化により、リン酸化H1ヒストンに対する脱リン酸活性は20ー40%上昇した。一方、リン酸化ミオシン軽鎖に対する脱リン酸活性は、Cキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化で50%促進されたが、Aキナ-ゼによるリン酸化では20%抑制された。異なるキナ-ゼによるδサブユニットのリン酸化が、異なる活性制御を行なうことが示唆された。

1. ヒ ト red blood corpuscle サ イ ト ゾ - ル painting よ り refined し た ホ ス フ ァ タ - ゼ I は タ イ プ 2 a に し, そ の は molecular weight 180000 で, 34 kda の catalyst サ ブ ユ ニ ッ ト alpha と 63 and 74 kda び の adjust サ ブ ユ ニ ッ ト beta, and delta 1 molecular ず を つ contains し て い る. CAMP dependency プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ (A キ ナ - ゼ) and び プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ C (C キ ナ - ゼ) に よ り, ホ ス フ ァ タ - 74 kda ゼ I の delta サ ブ ユ ニ ッ ト の セ リ ン residues が quantitative に リ ン acidification さ れ た. こ の リ ン acidification anti 応 に お け る ホ ス フ ァ タ - ゼ I に す seaborne る Km は, A キ ナ - ゼ で 0.27 mu M, C キ ナ - ゼ で 0.15 mu M で red blood corpuscle の の presumed with enzyme concentration (0.2 microns) に ほ ぼ etc し い. 2. ホ ス ホ リ ラ - ゼ キ ナ - ゼ, Ca ^ 2 + > < · カ ル モ デ ュ リ ン dependency プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ II, ミ オ シ ン 軽 lock キ ナ - ゼ, cGMP dependency プ ロ テ イ ン キ ナ - ゼ and び カ ゼ イ ン キ ナ - ゼ I に よ る delta サ ブ ユ ニ ッ ト の リ ン acidification は recognize め ら れ な か っ た. 3. リ ン acidification さ れ た delta サ ブ ユ ニ ッ ト の ト リ プ シ ン digestion ペ プ チ ド の is に よ り, A and C キ び ナ - ゼ に common の リ ン と acidification parts, C キ ナ - ゼ に な unique リ ン が acidification parts recognition め ら れ た. 4. A キ ナ - ゼ あ る い は C キ ナ - ゼ に よ る delta サ ブ ユ ニ ッ ト の リ ン acidification に よ り, リ ン acidification H1 ヒ ス ト ン に す seaborne る リ off ン acid active は 20 ー 40% し た. One party, リ ン acidification ミ オ シ ン 軽 lock に す seaborne る リ off ン acid active は, C キ ナ - ゼ に よ る delta サ ブ ユ ニ ッ ト の リ ン acidification で 50% promote さ れ た が, A キ ナ - ゼ に よ る リ ン acidification で は 20% inhibition さ れ た. Different な る キ ナ - ゼ に よ る delta サ ブ ユ ニ ッ ト の リ ン acidification が, different な る active suppression を line な う こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Hirofumi Usui: "Functions and properties of subunits in type 2A protein phosphatases from human erythrocytes" Advances in Protein Phosphatases. (1991)

Hirofumi Usui：“人红细胞 2A 型蛋白磷酸酶亚基的功能和特性”蛋白磷酸酶进展。

Kazuyoshi Azuma: "Purification and characterization of a rat liver membrane tyrosineーprotein kinase,the possible protooncogene cーyes product,p60^<cーyes>" Journal of Biological Chemistry. (1991)

Kazuyoshi Azuma：“大鼠肝膜酪氨酸蛋白激酶（可能的原癌基因 c-yes 产物）的纯化和表征，p60^<c-yes>”《生物化学杂志》（1991 年）。

Haruhisa Tsukamoto: "Tyrosine protein kinases in membrane fractions from rat cerebral cortex" Journal of Biochemistry. 104. 807-816 (1988)

Haruhisa Tsukamoto：“大鼠大脑皮层膜组分中的酪氨酸蛋白激酶”生物化学杂志。

Hirofumi Usui: "Phosphorylation of 74kDa δ subunit in a human erythrocyte type 2A protein phosphatase by cAMPーdependent protein kinase" Journal of Biological Chemistry.

Hirofumi Usui：“cAMP 依赖性蛋白激酶对人红细胞 2A 型蛋白磷酸酶中 74kDa δ 亚基的磷酸化”《生物化学杂志》。

Hirofumi Usui: "Three distinct forms of type 2A protein phosphatase in human erythrocyte cytosol" Journal of Biological Chemistry. 263. 3752-3761 (1988)

Hirofumi Usui：“人红细胞胞浆中 2A 型蛋白磷酸酶的三种不同形式”《生物化学杂志》。