寄生虫感染に伴い出現する自己抗体の研究

寄生虫感染引起的自身抗体的研究

• 批准号: 05670220
• 负责人: 山下 隆夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670220/
• 关键词: 自己抗体; 日本住血吸虫; Carbonic anhydrase; Trypanosoma cruzi; 寄生虫; モノクロナル抗体; エピトープ

寄生虫感染では、感染に伴い自己抗体が出現してくる。この自己抗体の研究はモノクロナル抗体を作製しエピトープを決定しないと進展しないと考え、日本住血吸虫、Trypanosoma cruzi の2種の寄生虫感染マウス脾臓細胞からハイブリドーマを樹立し、モノクロナル抗体IgMを産生するクローンを得た。日本住血吸虫感染マウス由来のクローンをGAO3、Trypanosoma cruzi感染由来のクローンをTSLO と命名した。これらのモノクロナル抗体を用いて以下の結果を得た。(1)lmmunoblot法で検討した結果どのクローンも原虫、吸虫、条虫、線虫など分類学的に広範囲な寄生虫抗原のみならず、同系健康マウスの脳、肺、肝、脾、腎、胃、腸、赤血球などの諸臓器とも反応することが認められた。どのクローンも主要バンドは似ており、犬鞭虫で2本のバンド(30,45KD)が、赤血球では30KDにのみ1本のバンドが認められた。他は14- 94KDの範囲に多くのバンドが検出された。(2)10%ホルマリン固定マウスの脳、肝、腎、胃を用いた免疫組織酵素抗体法では胃腺、尿細管壁、核の一部などが濃染された。 (3) ELISA用プレートにあらかじめ寄生虫またはマウス臓器抗原をコートし、トリプシン(0.01-40mM)で処理した後にELISAを行った。その結果、過沃素酸処理では抗体価は変化しなかったが、トリプシン処理では抗体価が低下し蛋白を認識することがわかった。(4)どのモノクロ抗体も赤血球の分子量30KDの物質と反応することから、この物質をcarbonic anhydrase(CA)と推定し反応を検討した結果、どのモノクロナル抗体も強い反応を示した。そこでCAをStaphylococcus aureus proteaseで処理した後、逆相クロマトグラフィーを行い各分画についてアミノ酸シークエンスを行った。その結果GA03、TSLOともGly-Val-Lys-Tyr-Ser-Ala-Glu およびLeu-His-Val-Ala-His-Trp-Asn-Ser-Alaのペプタイドを認識することが判った。

Parasitic infection is accompanied by its own antibodies. The study of this antibody has made great progress in the production of IgM antibodies against Schistosoma japonicum and Trypanosoma cruzi. Schistosoma japonicum infection, origin of disease, GAO3, Trypanosoma cruzi infection, origin of disease, TSLO The following results were obtained by using the anti-virus antibody. (1)lmmunoblot method was used to examine the results of protozoa, trematode, tapeworm, nematode, taxonomic classification, parasite antigen, homologous health, lung, liver, spleen, kidney, stomach, intestine, erythrocyte and other organs. The main character of the red blood cell is 30 KD, and the main character of the red blood cell is 30KD. He has a 14- 94KD range and a lot of questions. (2)10 The liver, kidney and stomach were fixed by the enzyme antibody method of immune tissue. The stomach gland, urine tubule wall and nucleus were stained intensively. (3)ELISA was performed after treatment with parasite antigen (0.01-40mM). As a result, the antibody was reduced by acid treatment, and the protein was reduced by acid treatment. (4)The molecular weight of red blood cells was 30KD. After the treatment of CA, Staphylococcus aureus protease, reverse phase, reverse phase, reverse phase. The results of GA03, TSLO and Gly-Val-Lys-Tyr-Ser-Ala-Glu and Leu-His-Val-Ala-His-Trp-Asn-Ser-Ala were identified.