SCIDマウスの放射線感受性を補正するヒト8番染色体上遺伝子の単離

分离人类 8 号染色体上的一个基因，可纠正 SCID 小鼠的放射敏感性

• 批准号: 05670303
• 负责人: 清水 素行
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670303/
• 关键词: SCIDマウス; 放射線感受性の補正; ヒト8番染色体; 染色体移入; 微小核細胞融合

SCID(severe combined immunodeficiency)マウスの線維芽細胞より樹立した細胞株(SCVA)の放射線高感受性を補正するヒト8番染色体上遺伝子の詳細なマッピングおよびその遺伝子を単離することを目的とした研究を行った。ヒト8番染色体移入SCVA細胞(SCVA#8)にγ線照射を行い作製したヒト8番染色体に部分的な欠失の認められる細胞クローンについて,ヒト8番染色体特異的コスミドマーカーによるDNA解析と放射線感受性の補正との相関を検索した結果,8p11.1-q11.1の領域にSCVA細胞の放射線高感受性を補正するヒト遺伝子の存在が推定された。そこで,この領域に存在するヒト遺伝子を単離することを目的として,この領域のみを含む放射線感受性の補正された細胞クローン(SC-8-10)からこの領域特異的なコスミドマーカーの分離を試み,新たな16個のマーカーを得た。これらのマーカーについてパルスフィールドゲル電気泳動を用いた制限酵素解析によるlong range restriction mapを作製した結果,この領域の大きさは約4Mb,5つの領域に分類されるコスミドマーカーであることが明らかとなった。次に,この8p11.1-q11.1領域にマップされるコスミドよりエキソントラップ法を用いて,27個のエキソン候補を単離した。サザンブロッド解析,ノーザンブロッド解析,DNA塩基配列の決定およびZooブロッド解析により,有力な候補となる5クローンを得た。これらの候補クローンをプローブとして,ヒト胸腺組織由来およびマウス大腿部骨髄由来のcDNAライブラリーを現在スクリーニング中である。当初計画にそった詳細な染色体マッピングおよび候補ヒトDNAプローブの単離と予定した研究を実施することができたと考えられ,さらにYACクローンの単離を平行して行い,遺伝子の単離を目指している。

SCID(severe combined immunodeficiency) high-radiation susceptibility of the established cell line (SCVA) of the stem cell line正するヒト8 chromosomes are left on the left 伝子のDetailsなマッピングおよびその缝子を単利することをPurposeとした Research を行った. HT8 chromosomes were transferred into SCVA cells (SCVA#8) and stained by γ-ray irradiation and HT8 Body parts of the body part of the body part of the recognition of the コられる cell クローンについて, ヒト8 chromosome-specific コスミドマーカーによるDNA analysis and radiosensitivity correction and related を検SOした results, 8p11.1-q1 1.1 In the field of SCVA, the existence of high radiosensitivity of SCVA cells has been corrected and the existence of them has been estimated.そこで,この区にexistentするヒト伝子を単利することをpurposeとして,この区のみをcontainsむradiation susceptibilityのcorrectionされた fine Cell クローン(SC-8-10)からこのarea-specific なコスミドマーカーのseparation testみ, new たな16 のマーカーをgetた. long range restriction The result of map production is about 4Mb, and the size of the field is about 5MB. Domain classificationされるコスミドマーカーであることが明らかとなった. Time, この8p11.1-q11.1 area にマップされるコスミドよThe りエキソントラップ法をいて, 27 のエキソン candidate を単里した.サザンブロッド analysis, ノーザンブロッド analysis, determination of DNA base arrangementよびZoo ブロッドanalytic により, powerful な candidate となる5 クローンを got た.これらの candidate クローンをプローブとして, ヒトthymus tissue origin およびマウスThigh bone marrow originated from cDNA ライブラリーを and is now スクリーニング中である. The original plan was to conduct a detailed study of the chromosome material and the candidate DNA material.ることができたと卡えられ, さらにYACクローンの単出をparallel して行い, 伝子の単里を目之出している.

项目成果

押村光雄: "ゲノム解析研究(蛋白質 核酸 酵素)" 共立出版株式会社, 510 (1993)

大岛光夫：《基因组分析研究（蛋白质、核酸、酶）》共立出版有限公司，510（1993）

Kurimasa,A.: "A human gene that restores the DNA-repair defect in SCID mice is located on 8p11.1-q11.1." Hum.Genet.93. 21-26 (1994)

Kurimasa,A.：“修复 SCID 小鼠 DNA 修复缺陷的人类基因位于 8p11.1-q11.1。”