血管トーヌス調節における新しい分子機構の解析

调节血管紧张度的新分子机制分析

• 批准号: 05670605
• 负责人: 伊藤 正明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670605/
• 关键词: 平滑筋; ミオシン リン酸化; プロテインホスファターゼ; 血管トーヌス

血管トーヌスの調節機構において、最も重要なものにミオシン軽鎖の可逆的リン酸化反応が考えられている。この反応において、脱リン酸化反応を触媒するミオシン結合型プロテインホスファターゼ(MBP)にその活性調節機構の存在が強く疑われ、新しい血管トーヌス調節因子として注目を集めている。今までの研究より、MBPはタイプ1δホスファターゼ(PP1δ)で、58kDのミオシン結合サブユニット(M-Sub)と38kDの触媒サブユニット(PP1δc)より構成されていると考えられている。今回は、PP1δcのcDNAクローニングならびにM-Subに対する抗体を作成し、MBPの構造に関する検討を行った。ニワトリ砂嚢平滑筋およびヒト大動脈よりPP1δcのcDNAクローニング・シークエンス解析を行ったところ、ラットPP1δcと各々アミノ酸レベルで99%、100%の高い相同性を有していた。M-Subに対するモノクローナル抗体(Ab-M)は、砂嚢平滑筋ホモジネートにおいて、130kDのタンパク質のみと交叉反応を示した。Protein-Aを用いた免疫沈降により、砂嚢平滑筋ホモジネートにおいてAb-Mにより130kDタンパク質と共にPP1δcが免疫沈降した。M-Subの組織分布は、脳、脾臓、心筋、腎、肺など種々の臓器で発現されているものの、大動脈、消化管などの平滑筋組織に特異的に多く、骨格筋、肝ではその発現はほとんど認められなかった。さらに、このAb-Mをプローベに、ニワトリ砂嚢平滑筋よりMBPの精製を、DEAE Sepharose、SP Sepharose、DEAE-Toyopearl 650、Mono S、Mono Qの各カラムを用いて行ったところ、精製MBPは、130,38,20kDの3つのサブユニットより構成されていることが明らかとなった。

The regulation mechanism of vascular diseases is the most important mechanism for the reversible acidification of vascular diseases. The existence of a novel activity regulator in the presence of a combination of reactive and deacidifying catalysts (MBP) is suspected. In the present study, MBP is composed of a combination of 58kD and 38kD components, i.e., PP1δ (PP1δ), M-Sub (M-Sub) and PP1 δ (PP1δc). This paper discusses how to make antibody and construct MBP for PP1 delta c cDNA library and M-Sub library 99% and 100% high identity of PP1 δc cDNA fragments were detected in the analysis of PP1 δ c cDNA fragments. M-Sub anti-virus antibody (Ab-M) anti-virus antibody, sand smooth rib anti-virus antibody, 130kD anti-virus antibody anti-virus antibody Protein-A is used in immune sedimentation, sand smoothing and production. Ab-M is used in immune sedimentation. PP1δc is used in immune sedimentation. M-Sub's tissue distribution is similar to that of the spleen, heart tendon, kidney and lung. The organs of M-Sub are found in the smooth muscle tissues of the aorta and digestive tract. The three types of MBP, DEAE Sepharose, SP Sepharose, DEAE-Toyopearl 650, Mono S and Mono Q are used in the production of MBP, 130,38 and 20kD.

项目成果

Takahashi Murakami: "Characterization of multiple molecular forms of Mg^<2+>-dependent protein phosphatase from Saccharomyces Cerevisiae." J.Biochem.(in press).

Takahashi Murakami：“来自酿酒酵母的 Mg^2 依赖性蛋白磷酸酶的多种分子形式的表征。”

Takaaki Suga: "Comparison of the effects of various vasodilators on the rat portal vein and mesenteric artery" Eur.J.Pharmacol.242. 129-136 (1993)

Takaaki Suga：“各种血管扩张剂对大鼠门静脉和肠系膜动脉的影响的比较”Eur.J.Pharmacol.242。

Setsuya Ckubo: "Characterization of a myosin-bound phosphatase from smooth muscle" Adv.Prot.Phosphatase. 7. 293-312 (1993)

Setsuya Ckubo：“平滑肌肌球蛋白结合磷酸酶的表征”Adv.Prot.磷酸酶。

Hiroshi Masuoka: "Two isoforms of cGMP-inhibited cyclic nucleotide phosphodiesterase in human tissues distinguished by their response to vesnarinone a new cardiotonic agent" Biochem.Biophys.Res.Commun.190. 412-417 (1993)

Hiroshi Masuoka：“人体组织中 cGMP 抑制的环核苷酸磷酸二酯酶的两种亚型，其特征在于它们对新强心剂 vesnarinone 的反应”Biochem.Biophys.Res.Commun.190。

Hiroo Itoh: "Inhibition of myosin light chain phosphatase during Ca^<2+>-independent vasocontraction." Am.J.Physiol. 265. C1319-C1324 (1993)

Hiroo Itoh：“在 Ca^2 独立的血管收缩过程中抑制肌球蛋白轻链磷酸酶。”