血管トーヌスを制御する新しい分子ならびにそのシグナル伝達の解析

控制血管紧张及其信号转导的新分子分析

• 批准号: 08670780
• 负责人: 伊藤 正明
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670780/
• 关键词: ミオシンリン酸化; ミオシンホスファターゼ; Rhoキナーゼ; ミオシン結合サブユニット

リン酸化ミオシンを脱リン酸化する酵素"ミオシンホスファターゼ(MP)"は、38kDの触媒サブユニットと130kD(M130)ならびに20kD(M20)の調節サブユニットより構成される新しいタイプ1プロテインホスファターゼのホロエンザイムである。M30は、MP活性発現ならびにその活性制御に関与している分子と考えられている。精製MPに、M130をリン酸化し、そのホスファターゼ活性を抑制させる内因性キナーゼが混在していることが明らかとなってきたので、このキナーゼの解析を行った。ゲル内リン酸化法ならびに種々の抗体を用いて検討したところ、精製MP中にカゼインキナーゼ2(CK2)とRhoキナーゼ(RhoK)が混在していることが判明した。CK2によるリン酸化はホスファターゼ活性に影響を与えず、RhoKによるM130のリン酸化のみがホスファターゼ活性を阻害した。しかしながら、内因性キナーゼはchelerythrineによって活性阻害を受けたが、RhoK活性は阻害されず、内因性キナーゼがさらに別のキナーゼである可能性もあり、この点に関し研究を続ける予定である。内因性キナーゼによるMBSのリン酸化部位は、M130の654番目のスレオニンで、この部を含むぺプチドは、RhoKによってよくリン酸化されることが確認された。MBSのドメイン構造を、M133(ニワトリMBS)の種々のフラグメントを作成し検討した。ミオシンホスファターゼ活性発現には、N末端側より295番目までのアンキリンリピート構造が必要であり、この部に触媒サブユニットならびにミオシンとの結合ドメインがあると考えられた。もう一つの調節サブユニットであるM20は、M133のC端1/3に存在すると考えられた。以上より、MBSのN端側はミオシンホスファターゼ活性発現に、C端側は活性制御に関与していると考えられた。

In addition, the 38kD contact medium is 130kD(M130) and 20kD (M20), and the structure of the 38kD contact medium is new. M30, MP activity development, activity control and molecular research Refined MP, M130, acid, sodium chloride, sodium chloride The method of acidification is used to determine the content of the protein. CK2: The acid is the active ingredient. RhoK is the active ingredient. For example, if the activity of RhoK is inhibited by chelerythrine, the activity of RhoK is inhibited by chelerythrine. If the activity of RhoK is inhibited by RhoK, the activity of RhoK is inhibited by chelerythrine. If the activity of RhoK is inhibited by RhoK, the activity of RhoK is inhibited by RhoK. The acid position of MBS, M130, 654, and RhoK are confirmed. The structure of MBS and the seed of M133(MBS) are discussed. The structure of the catalyst is necessary for the development of the activity on the N terminal side. M20, M133 and C-terminal 1/3 exist. The N-terminal side of MBS is active, and the C-terminal side is active.

项目成果

Mutsuki Amano: "Phosphorylation of myosin light chain by Rho-associated kinase (Ryo-kinase)" Journal of Biological Chemistry. 271. 20246-20249 (1996)

Mutsuki Amano：“Rho 相关激酶（Ryo 激酶）对肌球蛋白轻链的磷酸化”《生物化学杂志》。

Kazushi Kimura: "Regulation of myosin phosphatase by Rho and Rho-associated kinase(Rho-kinase)." Science. 273. 245-248 (1996)

Kazushi Kimura：“Rho 和 Rho 相关激酶（Rho 激酶）对肌球蛋白磷酸酶的调节。”

Takeshi Matsui: "Rho-associated kinase,a novel serine/threonine kinase,as a putative target for the small GTP-binding protein Rho" The EMBO Journal. 15. 2208-2216 (1996)

Takeshi Matsui：“Rho 相关激酶，一种新型丝氨酸/苏氨酸激酶，作为小 GTP 结合蛋白 Rho 的推定靶点”EMBO 杂志。

Kazuhito Ichikawa: "Phosphorylation of the large subunit of myosin phosphatase and inhibition of phosphatase activity" Journal of Biological Chemistry. 271. 4733-4740 (1996)

Kazuhito Ichikawa：“肌球蛋白磷酸酶大亚基的磷酸化和磷酸酶活性的抑制”《生物化学杂志》。

Kazuhito Ichikawa: "Interactions and properties of the smooth muscle myosin phospatase" Biochemistry. 35. 6313-6320 (1996)

Kazuhito Ichikawa：“平滑肌肌球蛋白磷酸酶的相互作用和特性”生物化学。