血管内皮細胞におけるNO合成酵素の調節機構

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血管内皮細胞における一酸化窒素合成酵素(ecNOS)の調節機構を検討する目的で以下の検討を行なった。1.ecNOS活性に及ぼす各種脂質の影響:ウシ大動脈内皮細胞よりpollockらの方法を用いてecNOSを抽出し、その活性を^3H-arginineから^3H-citrulineへの変換を用いて測定した。各種の脂質が活性に及ぼす影響を検討すると、リゾフォスファチジルコリン(LPC)、フォスファチジルコリンなどのリン脂質はCa^<2+>ならびにcalmodulin存在下にecNOS活性を増加させるが、アラキドン酸は減少させることが判明した。2.ecNOS mRNA発現に及ぼす各種サイトカイン、脂質の影響:ウシ大動脈内皮細胞よりecNOS cDNAよりRNAプローブを作成しRNAse protection assayを行なった。IFN α β、IFNγはecNOS mRNAを増加させたのに対し、TNFαは減少させた。また酸化LDLならびにLPCはmRNAを増加させた。nativeLDL、HDLは影響を与えなかった。3.動脈硬化血管におけるecNOS mRNAの発現:in situ hybridization法を用いた検討により遺伝性高脂血症家兎大動脈内皮におけるecNOS mRNAの発現は正常家兎血管内皮に比べ増加していることが判明した。以上の検討により血管内皮細胞ecNOS活性は各種脂質により調節されており、またそのmRNA発現はサイトカイン、LPC、酸化LDLにより影響を受けることが判明した。