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生体心筋内への遺伝子導入を用いた低分子量G蛋白質Rhoの心筋肥大への関与の検討

利用基因导入活体心肌检查低分子量 G 蛋白 Rho 与心肌肥厚的关系

基本信息

批准号：
09877132
负责人：
川嶋成乃亮
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877132/
关键词：
心筋細胞 Rho c-fos遺伝子遺伝子導入

项目摘要

1.ラットの培養心筋細胞を用い、リン酸カルシウム法にて不活性型RhoA遺伝子およびClostridium botulinum C3 transferase(C3)のプラスミドを導入し、心筋肥大因子であるendothelin-1(ET-1)、phenylephrine(PE)等の刺激による心筋細胞シグナル伝達に及ぼす影響の検討を、特に初期反応遺伝子であるc-fos遺伝子の発現に着目して行なった。心筋細胞に導入したc-fos promrtor/enhancerの活性化に対する影響にて、それぞれの因子のc-fos遺伝子発現に対する作用の判定を行った。Rhoを不活性化するC3の共導入はET-1、PEおよびPMAの刺激によるc-fos promotor/enhancerの活性化を抑制した。また、活性型Rhoの導入により、c-fos promotor/enhancerの活性化が生じ、この活性化はprotein kinase Cのdown regulationや、あるいはPKC inhibitor、tyrosine kinase inhibitor、PI-3 kinase inhibitorの投与により抑制されなかった。以上より種々の肥大刺激因子による心筋細胞のc-fos遺伝子発現にRhoが関与していることが判明した。2.in vivoにおいて心筋においてRhoがいかなる役割を果たしているかを検討する目的にて、in vovoにてラットの心筋に活性型RhoA遺伝子プラスミドを導入する系の作成を試みた。現在は予備実験中であるが、HVJ-リポソーム法を用い、開胸直視下に心筋内に直接注射針にて注入することにより、ルシフェラーゼ遺伝子あるいは、内皮型NO合成酵素遺伝子を、効率よく導入できることを確認した。今後は実際に活性型RhoA遺伝子プラスミドを導入する予定である。

1. To introduce the inactive RhoA gene and Clostridium botulinum C3 transferase(C3) into cultured cardiac muscle cells by using the medium and alkaline medium method, and to investigate the expression and influence of endothelin-1(ET-1) and phenylephrine(PE) on cardiac muscle cells, especially on the development of c-fos gene in the early stage of cardiac hypertrophy. To determine the effects of c-fos promoter/enhancer activation introduced into cardiac muscle cells and the effects of c-fos gene expression on existing factors. Rho inactivation and C3 co-introduction inhibit c-fos promoter/enhancer activation under ET-1, PE and PMA stimulation. The introduction of active Rho, activation of c-fos promoter/enhancer, down regulation of protein kinase C, and administration of PKC inhibitor, tyrosine kinase inhibitor, PI-3 kinase inhibitor are also discussed. The above results indicate that Rho is related to the expression of c-fos gene in cardiac muscle cells. 2.in Vivo Tendon Rho Tendon Rho Tendon Now we are ready to use HVJ-multiplex method, open chest direct injection into the heart muscle, and confirm the introduction of endothelial NO synthase gene. In the future, the introduction of active RhoA genes will be scheduled.