新規てんかんモデル「エタクリン酸誘発けいれん」の解析

新型癫痫模型“利尿酸诱发惊厥”分析

• 批准号: 05671911
• 负责人: 原 満良
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05671911/
• 关键词: エタクリン酸; 間代性強直性痙攣; c‐fos; ノ-ザンブロット; in sith hybridization; NMDA受容体阻害薬; 抗痙攣薬

我々は,マウスにエタクリン酸(EA)の脳室内投与を行い,反復性間代性強直性痙攣が誘発されることを見いだしている。本研究では,この痙攣性神経興奮に付随しておこる遺伝子転写の変化を明らかにするため,興奮-転写変化の連関に深く関わっていると考えられる最初期遺伝子c‐fosの発現について詳細に検討した。EA投与後の各経過時間(0,15,30,60分,24時間,7,10,14,21日)の全脳からRNAを抽出し,ジゴキシゲニンでラベルしたc‐fos cDNAプロ-ブを用いてノ-ザンブロットにより分析した。C‐fosのmRNA量は30-60分後にピ-クに達した後減少し,24時間でほぼ元のレベル戻った。しかし,その後再び7日後から増加し10-14日後にピ-クが見られた。EA投与後30分および7日後のc‐fos発現の脳内分布をin situ hybridizationにより分析した。30分後,7日後共に,海馬,大脳皮質および扁桃にmRNAシグナルが著明に検出された。両経過時間間では海馬内分布に差があり,また,30分後に扁桃が,7日後に皮質がより強く染色された。免疫組織化学によりFos蛋白質について解析したところ,上記と同様の経時的変化,脳内分布を示した。NMDA受容体阻害薬2‐aminophosphonovaleric acid(APV)および抗痙攣薬ジアゼパム,フェノバルビタ-ル,バルプロン酸をそれぞれ腹腔内に前投与した後,EA投与を行うと全例に痙攣の消失および30分後のmRNA量の減少が見られた。同処理例14日後のmRNA量についても検討中である。以上の結果より,EA脳室内投与後のc‐fos mRNAの増加の様式は,痙攣の発現に一致した初期相と10-14日後をピ-クとする後期相からなることが明らかになった。今後,両増加相においてFos蛋白質により転写の制御を受ける遺伝子を明らかにし,その発現と痙攣発生または準備状態との関連について解析したい。

I 々 は, マ ウ ス に エ タ ク リ ン acid (EA) の with を い 脳 interior shots, repeatability between generation tetanic convulsion sex が 発 lure さ れ る こ と を see い だ し て い る. This study で は, こ の spastic god 経 excited に pay with し て お こ る heritage 伝 son planning write の variations change を Ming ら か に す る た め, excited - planning writing - the の even masato に deep く masato わ っ て い る と exam え ら れ る most early heritage 伝 child c ‐ fos の 発 now に つ い て detailed に beg し 検 た. Cast with the EA の 経 each time (0,15,30,60 points, 24 time, 7,10,14,21) の full 脳 か ら to extract RNA を し, ジ ゴ キ シ ゲ ニ ン で ラ ベ ル し た ‐ c fos cDNA プ ロ - ブ を with い て ノ - ザ ン ブ ロ ッ ト に よ り analysis し た. The amount of c-fos <s:1> mRNA is にピ- <s:1> に after 30-60 minutes, it reaches <s:1> た and then decreases by <s:1>. After 24 hours, it is でほぼ yuan and <s:1> レベ 戻った 戻った 戻った 戻った. The にピ,そ,そ, び, 7 days later にピ ら, add そ, 10-14 days later にピ- が が see られた. After 30 minutes of EA investment, および7 days later, <s:1> c-fos occurred. The distribution within 脳 をin situ hybridizationによ analysis た. Thirty minutes later, seven days later, a total of に, hippocampus, large 脳 cortex および amygdala にmRNAシグナ シグナ が が were clearly に検 and された were published. Struck 経 time between で は distribution within the hippocampus に poor が あ り, ま た, 30 minutes after に almond が, 7 later に cortical が よ り strong く dyeing さ れ た. Immunohistochemical に よ り Fos protein に つ い て parsing し た と こ ろ, written と with others の 経 variations, when 脳 distribution within を shown し た. NMDA receptor inhibitor 2-aminophosphonovaleric Acid (APV) お よ び antispasmodic 薬 ジ ア ゼ パ ム, フ ェ ノ バ ル ビ タ - ル バ ル プ ロ ン acid を そ れ ぞ れ intra-abdominal に before and し た after EA cast with を う と disappear all cases に spasm の お よ び 30 minutes after の mRNA decrease の が see ら れ た. In the same case, the amount of <s:1> mRNA after example 14 is に, に, て, て, 検 and である. の above results よ り, EA 脳 indoor and after の c ‐ fos mRNA の raised plus の は others type, convulsion の 発 now に consistent し た after initial phase と 10-14 を ピ - ク と す る late phase か ら な る こ と が Ming ら か に な っ た. In the future, that struck rights and phase に お い て Fos protein に よ り planning write の suppression を by け る heritage 伝 son を Ming ら か に し, そ の 発 now born と spasm 発 ま た は readiness と の masato even に つ い て parsing し た い.

项目成果

C.Inagaki et al.: "Transporting Cl^-‐ATPase in rat brain." Adv.comparative environment.Physiol.(in press).

C. Inagaki 等人：“在大鼠大脑中转运 Cl^-ATP 酶。”Adv.comparative 环境。Physiol。（正在出版）。

X‐T.Zeng et al.: "Electrogenic and phosphatidylinositol‐4‐monophosphate.." Brain Res.(in press).

X-T. Zeng 等人：“生电和磷脂酰肌醇-4-单磷酸盐..”Brain Res。

原満良他: "ブレインサイエンス最前線〓95" 講談社サイエンティフィク(予定), (1994)

原原等人：《脑科学前线95》讲谈社科学（计划），（1994）

M.Hara et al.: "Spatial diversity of chloride transporters in hippo..." Ann.N.Y.Acad.Sci.707. 421-423 (1993)

M.Hara 等人：“河马氯离子转运蛋白的空间多样性……”Ann.N.Y.Acad.Sci.707。

原満良他: "最新医学からのアプロ-チ6 イオンチャネル1" メジカルビュ-社, 230 (1993)

原原等人：“最新医学的方法6离子通道1”Medical View-sha，230（1993）