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視細胞光依存性cGMP加水分解酵素阻害サブユニットのリン酸化と明順応

感光细胞光依赖性cGMP水解酶抑制亚基磷酸化和光适应

基本信息

批准号：
05680581
负责人：
林文夫
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680581/
关键词：
photoreceptor protein kinase phosphodiesterase phosphorylation cGMP inhibitory subunit light adaptation phosphatidylinositol

项目摘要

脊椎動物視細胞細胞質中のcGMP濃度は光照射に伴って急速に低下する。これは、光退色したロドプシンによって活性化されたGTP結合タンパク質がcGMP分解酵素(PDE)からその調節サブユニット(Pγ)を解離させてPDEを活性化することによって行われている。本研究者は、このPγが細胞内の未知のプロテインキナーゼによってすみやかにリン酸化されることを初めて明らかにしたが、本研究計画ではPγのin vivoでの光依存性リン酸化を明らかにし(FEBS Letters,1994)、さらに、視細胞内のPγリン酸化酵素の精製を試み、いくつかの予備的知見を得た(発表予定)。Pγリン酸化酵素は0.1mM程度のCaCl_2共存下に視細胞外節の膜分画から遊離し、Mono Q等の陰イオン交換カラムに結合し、NaClによって溶出される。視細胞に存在するとされる他のプロテインキナーゼ(ロドプシンキナーゼ、PKA,PKC)から分離され、活性化因子としてホスファチジルイノシトールを要求する。ゲルクロマトグラフィーでは約70kDaの分子量を示すが、ゲル内リン酸化法では42kDaのプロテインキナーゼが検出される。この42kDaのキナーゼは光依存的に活性化されるという非常に興味深い性質を示している。このプロテインキナーゼによるPγのリン酸化の生理的意義は極めて重要なものと考えられ、この点を早急に明らかにしたい。

The concentration of cGMP in the cytoplasm of vertebrate optic cells decreases rapidly in response to light exposure. This is the first time that a GTP-binding enzyme (PDE) has been activated in the light of photodegradation. The present study aims to elucidate the light-dependent acidification of Pγ in vivo (FEBS Letters,1994), and to explore the purification and preparation of Pγ-acidifying enzymes in visual cells (Table 1). Under CaCl_2 blue shift of 0.1 mM, Pγ-acidifying enzyme dissociates from membrane of outer segment of visual cell, and Mono Q dissociates from membrane of outer segment of visual cell, and NaCl dissociates from membrane. The presence of visual cells requires the isolation and activation of other factors such as PKA and PKC. A molecular weight of approximately 70kDa is shown in the table below. A molecular weight of approximately 42kDa is shown in the table below. This 42kDa protein is highly active and highly interesting. The physiological significance of this phenomenon is extremely important.