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エストロゲンで誘導されてLHサージと発情行動を誘発するタンパク質のクローニング

克隆一种诱导雌激素诱导的 LH 激增和发情行为的蛋白质

基本信息

批准号：
05680696
负责人：
樋口隆
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kochi Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05680696/
关键词：
エストロゲン視床下部 messenger RNA 性行動 LH タンパク質

项目摘要

文部省科学研究費の援助を受けた研究により、卵巣摘出ラットにエストロゲンを投与して、脳内に発現するタンパク質をコードするcDNAの候補をある程度同定することができた。ウィスター系雌ラットの卵巣を摘出したもの(コントロール群)と、卵巣を摘出してエストロゲン(estradiolbenzoate)50mugを2日間投与したラット(エストロゲン処置群)の視床下部を取り出し、グアニジンイソシアネートの存在下で全RNAを抽出した。この全RNAからさらにoligo-dT celluloseをカラムを用いたアフィニティクロマトグラフィーでmessenger RNAを抽出した。エストロゲン処置群の視床下部messenger RNAを鋳型として逆転写酵素を用いて、reverse transcriptionを行って、そのcDNAを合成した。このcDNAライブラリーと多量のコントロール群の視床下部messenger RNAとをハイブリダイズさせて、両群に共通に発現しているcDNAを除き、ハイブリダイズされずに残ったcDNA(つまりエストロゲンで視床下部に誘導されたcDNA)をランダムプライマー法で^<32>P-dCTPでラベルした。エストロゲン処置群、コントロール群の両方のmessenger RNAを電気泳動して、ナイロン膜に転写したものを、このラベルしたcDNAとハイブリダイズさせた結果、コントロール群と比べてエストロゲン処置群に強く発現する数本のバンドが認められた。今年度の成果はここまでであるが、今後はこのバンドを形成したcDNAをクローニングし、さらにバクテリアあるいは真核細胞に導入して、コードするタンパク質を合成させて、そのタンパク質を用いて性行動、LH分泌に及ぼす影響を調べたいと考えている。

Ministry of Education scientific research funds received research, egg extraction, seed extraction, seed It is the female's egg that is extracted from the lower part of the visual bed. The whole RNA is extracted in the presence of the female's egg. The whole RNA is extracted from oligo-dT cellulose. The gene expression of RNA in the lower part of the retina was determined by reverse transcription and cDNA synthesis. The cDNA sequence of this cDNA sequence is very different from that of the cDNA sequence of the lower part of the retina messenger RNA sequence of the human genome<32>. The messenger RNA of the target group, the target group and the target group is electrically activated, and the target group is electrically activated, and the target group is electrically activated. This year's achievements include the following: introduction of eukaryotic genes into eukaryotic organisms, synthesis of eukaryotic genes, modulation of sexual activity, LH secretion, and influence of eukaryotic genes.