エストロゲンで視床下部に発現する新しい蛋白質の機能解析

雌激素在下丘脑表达的新蛋白质的功能分析

• 批准号: 08680864
• 负责人: 樋口 隆
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kochi Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680864/
• 关键词: エストロゲン; cDNA; 性周期; 性行動; LHサージ

Differential display法を用いてラット性周期に関連して、エストロゲンにより視床下部に発現する遺伝子探査を行い、卵巣摘出ラット視床下部にエストロゲン投与により発現するcDNA(60bp PCR産物)を得ていた。またこのcDNA(ITE)をプローブとして、ラット性周期の各ステージの視床下部RNAをノーザンブロット法にて調べたところ、発情前期の午前に一過性に発現するmRNA(2.5〜3kb)を同定していた。今回、このmRNAに対するcDNAの単離を試みた。(1)ラット発情前期(午前10時)の視床下部RNAよりcDNAライブラリーを作成し、60bpのcDNA(ITE)をプローブとしてスクリーニングを行った。いろいろなハイブリダイゼーション条件、wash条件にて10個のcDNAを得たが、いずれにおいてもノーザン解析において性周期に特異的発現変化はなく、また上記2.5〜3kb mRNAに相当するものが単離できなかった。(2)60bpのcDNAシークエンスをもとに各種プライマー(12種)を合成し、3′RACE法にて発情前期午前10時に一過性に発現するcDNA単離を試みた。約20個のPCR産物をノーザン解析したが、目的とするcDNAは同定できなかった。現在、cDNAライブラリーの作製をやり直しており、再度2.5〜3kb mRNAに対するcDNA単離を試みている。また、Suppression PCR法を用い、発情前期の視床下部に特異的に発現するcDNA単離を行っているところである。今後、目的とした遺伝子が得られ次第、リコンビナント蛋白質、モノクロナール抗体等を作製し、その機能の解明に進む予定である。

Differential display method was used to detect cDNA(60bp PCR product) in the lower part of the genome. The mRNA(2.5 - 3kb) expressed transiently in the lower part of the optic bed at each stage of the gene cycle was identified by the gene expression method. Now, the mRNA of this gene is related to the cDNA sequence. (1)In the early stage of development (10:00 a.m.), the RNA in the lower part of the visual bed was prepared, and the cDNA(ITE) in the 60bp was prepared. The expression of 10 cDNAs was detected under wash conditions, and the expression of 2.5 - 3kb mRNA was detected under wash conditions. (2)60bp cDNA fragments were synthesized and transiently detected at 10:00 a.m. by 3′RACE. About 20 PCR products were analyzed and identified. Now, the cDNA translation system is being developed, and the cDNA translation system for 2.5 - 3kb mRNA is being developed. The expression of cDNA in the lower part of the optic bed during pre-development and Suppression PCR was studied. In the future, the aim is to improve the order of gene expression, protein production, antibody production, and functional interpretation.