低血漿浸透圧ラット系統の確立と浸透圧受容器の卵細胞への発現

低血浆渗透压大鼠品系的建立及卵细胞渗透压感受器的表达

• 批准号: 03807159
• 负责人: 樋口 隆
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: 福井医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03807159/
• 关键词: 浸透圧受容器; 低血漿浸透圧血症; 卵母細胞

本研究の目的は、1.低血漿浸透圧ラットの系統を確立すること、2.浸透圧受容器を卵細胞に発現させることであった。目的1を達成するために、教室で飼育しているラットのコロニ-の中から、低い血漿浸透圧を示す個体どうしを交配して、今までに6世代までの交配を行った。その結果合計407匹の仔が生まれた。離乳直後に血漿浸透圧を測定して、各世代の中で正常な値を示すもの4匹と、低い値を示すもの4匹を残して、交配を繰り返した。407匹のラットの血漿浸透圧は、平均297mOsm/kgで、発現頻度をグラフに表したところ275ー280mOsm/kgにやや小さいピ-クを示すものの、ほぼ正規分布となり、明かな二つのピ-クは認められなかった。このラットのコロニ-は1991年の11月頃にマイコプラズマに感染してしまったために出生率が低下し、今後更に交配を続けるのが困難な状態である。第2の目的のために、まず、アフリカツメガエルの卵細胞に、mRNAの情報を発現させ、卵細胞の膜電位を測定して、情報が発現したかどうかを判定する系の確立を目指した。ラットの肝臓から、acid guaniduim thiocyanateーphenolーchloroform法でRNAを抽出し、さらにoligotexーdTカラムを用いたアフィニティ-クロマトグラフィ-でmRNAを抽出した。このmRNAをマイクロピペットで卵に注入して、3ー5日後に膜電位を測定したところアンジオテンシンII、バゾプレッシンに反応して膜電位が変化する卵がみられた。そこで45匹のラットの脳の第3脳室前壁部(室傍核、視索上核を含む)を切り出して合計約1gの組織からmRNAを抽出して、同じように卵細胞に発現させて、NaClを追加して高張にしたRinger液に対する反応を調べた。現在までのところ、浸透圧刺激に反応する卵を見いだすことは出来なかった。今後はより多くの脳組織を集めてmRNAを抽出するか、より少量のmRNAで情報が発現する方法を検討したい。

The purpose of this study is, 1. To establish a low plasma permeation pressure ラット を system を, する と と, 2. The を egg cells that permeate the receiving container are に and させる させる とであった occur. Objective 1 を reached す る た め に, classroom で rearing し て い る ラ ッ ト の コ ロ ニ - の か ら plasma penetration, low い 圧 を す in individual ど う し を mating し て, today ま で に 6 generations ま で の mating を line っ た. The total result was 407 pups が and まれた. From milk straight after plasma penetration に 圧 を determination し て, each generation の で normal な numerical を shown す も の four と, low い numerical を shown す も の four を residual し て, mating を Qiao り return し た. 407 の ラ ッ ト の plasma penetration 圧 は, an average of 297 mosm/kg で, 発 now frequency を グ ラ フ に table し た と こ ろ 275 ー 280 mosm/kg に や や small さ い ピ - ク を shown す も の の, ほ ぼ normal distribution と な り, Ming か な two つ の ピ - ク は recognize め ら れ な か っ た. こ の ラ ッ ト の コ ロ ニ - は の November 1991 hectares of に マ イ コ プ ラ ズ マ に infection し て し ま っ た た め に low birthrate が し, in the future more に mating を 続 け る の が difficult な state で あ る. 2 の purpose の た め に, ま ず, ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の egg に, mRNA の intelligence を 発 now さ せ, egg の membrane potential を determination し て, intelligence が 発 now し た か ど う か を determine す る を refers is の established し た. ラ ッ ト の is crucial liver か ら, acid guaniduim thiocyanate ー phenol ー chloroform method を drew し で RNA, さ ら に oligotex ー dT カ ラ ム を with い た ア フ ィ ニ テ ィ - ク ロ マ ト グ ラ フ ィ - で mRNA を spare し た. こ の mRNA を マ イ ク ロ ピ ペ ッ ト で eggs に injection し て, 3 ー 5 に membrane potential を determination し た と こ ろ ア ン ジ オ テ ン シ ン II, バ ゾ プ レ ッ シ ン に anti 応 し て membrane potential が variations change す る eggs が み ら れ た. そ こ で 45 horse の ラ ッ ト の 脳 の 脳 room before 3 walls (room alongside nuclear, nuclear を む) on cable を り cutting out し て together about 1 g の organization か ら mRNA を spare し て, with じ よ う に egg に 発 now さ せ て, NaCl を additional し て high に し た Ringer solution に す seaborne る anti 応 を adjustable べ た. Now ま で の と こ ろ, soak 圧 stimulate に 応 す る eggs を see い だ す こ と は out な か っ た. More than the next は よ り く の 脳 organization を set め て mRNA を spare す る か, よ り small の mRNA で intelligence が 発 now す る method を beg し 検 た い.