新規なフリーフロー等電点電気泳動法による多成分タンパク質の同時連続分離

使用新型自由流动等电聚焦方法同时连续分离多组分蛋白质

• 批准号: 07650913
• 负责人: 米本 年邦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07650913/
• 关键词: 電気泳動; 等電点濃縮; 連続分離; タンパク質; 牛血清アルブミン; 牛血液ヘモグロビン

泳動室に形成させた陽極近傍で低く、陰極近傍で高いpH勾配上で、緩衝剤の選択により、適当にpHを調製した三成分混合タンパク質溶液を二つのpH位置から連続的に供給し、さらに二つの原料供給部間の循環流路の一部を交差させることで、低等電点タンパク質を陽極と陽極近傍から、中間等電点タンパク質を交差流路の中間位置から、さらに高等電点タンパク質を陰極近傍から、それぞれ単離製品として連続的に回収する方式の連続式等電点電気泳動分離装置を作製して、モデルタンパク質として牛血清アルブミン(等電点pI=5.1)、α-アミラーゼ(等電点pI=6.0)、牛血液ヘモグロビン(等電点pI=6.9)を選び、さらに緩衝剤としてジペプチドであるグリシルグリシン(等電点pI=5.7)とリジルグルタミン酸(等電点pI=6.1)、支持電解質として塩化カリウムを選んで原料溶液として、多成分タンパク質の連続分離実験を行った。始めに、ヘモグロビンとアルブミンの二成分の連続分離実験を行い、二成分の完全単離を実証するとともに、分離プロセスの数学モデルを構築した。次に、アミラーゼを加えた三成分系の実験を行った。この場合、低pH等電点を有する牛血清アルブミンと高pH等電点を有する牛血液ヘモグロビンは、純度95%以上で単離されたが、中間pH等電点を有するα-アミラーゼの製品純度は70%程度に止まっている。この原因として、ヘモグロビンとアルブミンの両端への輸送が完全に行われていないことが考えられるため、現在、純度の向上を目指して、緩衝剤の種類と原料供給位置を変化させつつ実験的検討を行っている。

Swimming room に form さ せ た anode nearly alongside low で く, cathode near alongside で high い pH hook with で, buffer tonic の sentaku に よ り, appropriate に pH を modulation し た three ingredients タ ン パ を ク qualitative solution 2 つ の pH position か ら even 続 に supplies し, さ ら に two つ の の circulation flow between raw material supply department の a を job さ せ る こ と で, low electric point タ ン パ ク quality を と anode, nearly alongside か ら, intermediate isoelectric point タ ン パ ク qualitative を job flow の middle か ら, さ ら に higher isoelectric point タ ン パ ク qualitative を cathode near alongside か ら, そ れ ぞ れ 単 from products と し て even 続 に back 収 す る way の even 続 type isoelectric point system of electricity 気 swimming separation device を し て, モ デ ル タ ン パ ク qualitative と し て bovine serum ア ル ブ ミ ン (isoelectric point p I = 5.1), alpha ア ミ ラ ー ゼ isoelectric point (pI = 6.0), bovine blood ヘ モ グ ロ ビ ン isoelectric point (pI) = 6.9 を び, さ ら に buffer tonic と し て ジ ペ プ チ ド で あ る グ リ シ ル グ リ シ ン isoelectric point (pI = 5.7) と リ ジ ル グ ル タ ミ ン acid isoelectric point (pI = 6.1), the supporting electrolyte と し て salt chemical カ リ ウ ム を choose ん で raw material solution と し て, multiple ingredients タ ン パ ク qualitative の even 続 separation be 験 を line っ た. Beginning め に, ヘ モ グ ロ ビ ン と ア ル ブ ミ ン の two component の even 続 separation be 験 を い, two component の 単 completely from を card be す る と と も に, separating プ ロ セ ス の mathematical モ デ ル を build し た. The three components of に, ア ラ ラ ゼを plus えた are を laboratory った. こ の occasions, low pH isoelectric point を have す る bovine serum ア ル ブ ミ ン と high pH isoelectric point を す る cow blood ヘ モ グ ロ ビ ン は, more than 95% purity で 単 from さ れ た が, intermediate pH isoelectric point を have す る alpha ア ミ ラ ー ゼ の products は 70% purity degree に check ま っ て い る. こ の reason と し て, ヘ モ グ ロ ビ ン と ア ル ブ ミ ン の struck the へ の conveying line が completely に わ れ て い な い こ と が exam え ら れ る た め, now, purity の upward を refers し て, buffer tonic の と を raw material supply position - the さ せ つ つ be 験 beg を 検 line っ て い る.

项目成果

T.Yonomotoら: "Continuous Separation of Proteins by Recycling Free-Flow Isoelectric Focusing with Crude Feed supply and Purified Product Removal" Bioseparation. (印刷中).

T. Yonomoto 等人：“通过回收自由流动等电聚焦以及粗饲料供应和纯化产物去除来连续分离蛋白质”生物分离（正在出版）。