植物スクアレン合成酵素の大腸菌における発現と性状解析

植物角鲨烯合酶在大肠杆菌中的表达和表征

• 批准号: 07660441
• 负责人: 畑 信吾
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660441/
• 关键词: シロイヌナズナ; ステロール生合成; 融合タンパク質; デヒドロスクアレン

1.マウスのスクアレン合成酵素遺伝子をプローブにして、シロイヌナズナcDNAライブラリーを検索し、陽性クローンを得た。その塩基配列を決定したところ、410個のアミノ酸からなるオープンリーディングフレームが見い出された(分子量の計算値は47kDa)。2.推定されるアミノ酸配列は、これまでに報告された酵母からヒトに至る他の生物種の本酵素と有意な相同性(42-44%)を示した。3.ノーザンブロッティングによる解析において、mRNAのサイズは1.6kbであることが示された。4.シロイヌナズナの酵素のコーディング領域全体をプラスミドpBluescriptllKS(-)にサブクローニングし、プラスミド上にコードされたβ-ガラクトシダーゼのN末端部との融合タンパク質を作れるようにした。この発現ベクターを導入された大腸菌の無細胞抽出液は、NADPHとMg^<2+>の存在下に、^<14>Cで標識されたファルネシルピロリン酸をスクアレンに転換する高い活性を有していた。5.一方、NADPHが存在しないでMn^<2+>を加えた条件においては、この無細胞抽出液はデヒドロスクアレンを生成した。6.マウスの本酵素を用いても同様な結果が得られたので、デヒドロスクアレンを副産物として生成する性質は、広く直核生物一般の本酵素に保存されていると結論した。

1. マ ウ ス の ス ク ア レ ン synthetic enzyme heritage 伝 son を プ ロ ー ブ に し て, シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を 検 し and positive ク ロ ー ン を た. そ の salt base with column を decided し た と こ ろ, 410 の ア ミ ノ acid か ら な る オ ー プ ン リ ー デ ィ ン グ フ レ ー ム が see い out さ れ た (molecular weight の numerical は 47 kda). 2. Presumption さ れ る ア ミ ノ acid with は, こ れ ま で に report さ れ た yeast か ら ヒ ト に to る he の biological の this enzyme と intentionally な identity (42-44%) を shown し た. 3. ノ ー ザ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ る parsing に お い て, mRNA の サ イ ズ は 1.6 KB で あ る こ と が shown さ れ た. 4. シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ の enzyme の コ ー デ ィ ン グ field all を プ ラ ス ミ ド pBluescriptllKS (-) に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し, プ ラ ス ミ ド on に コ ー ド さ れ た beta ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ の N terminal part と の fusion タ ン パ ク qualitative を as れ る よ う に し た. こ の 発 now ベ ク タ ー を import さ れ た coliform の cell-free extract は, NADPH と Mg ^ 2 + < > の に, in the presence of ^ < > 14 C で logo さ れ た フ ァ ル ネ シ ル ピ ロ リ ン acid を ス ク ア レ ン に planning in す る high い active を し て い た. 5. A party, NADPH が し な い で Mn ^ 2 + > < を plus え た conditions に お い て は, こ の cell free extract は デ ヒ ド ロ ス ク ア レ ン を generated し た. 6. マ ウ ス の this enzyme を い て も with others in the result of な が ら れ た の で, デ ヒ ド ロ ス ク ア レ ン を by-products と し て generated す る properties は, hiroo く straight nuclear biological の this enzyme に generally kept さ れ て い る と conclusion し た.

项目成果

H. Kouchi and S. Hata: "GmN56, a novel nodule-specific cDNA from soybean root nodules encodes a protein homologous to isopropylmalate synthase and homocitrate synthase." Mol. Plant-Microbe Interact.8. 172-176 (1995)

H. Kouchi 和 S. Hata：“GmN56 是一种来自大豆根瘤的新型根瘤特异性 cDNA，编码与异丙基苹果酸合酶和高柠檬酸合酶同源的蛋白质。”

H. Kouchi et al.: "Distinct classes of mitotic cyclins are differentially expressed in the soybean shoot apex during the cell cycle." Plant Cell. 7. 1143-1155 (1995)

H. Kouchi 等人：“在细胞周期期间，不同类别的有丝分裂细胞周期蛋白在大豆芽尖的表达存在差异。”

T. Nakashima et al.: "Cloning, expression, and characterization of cDNAs encoding Arabidopsis thaliana squalene synthase." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 92. 2328-2332 (1995)

T. Nakashima 等人：“编码拟南芥角鲨烯合酶的 cDNA 的克隆、表达和表征。”

K. Izui et al.: "Enzymological evidence for the involvement of a calcium-dependent protein kinase in regulatory phosphorylation of PEP carboxylase in maize." Photosynthesis: from Light to Biosphere. 5. 163-165 (1995)

K. Izui 等人：“钙依赖性蛋白激酶参与玉米 PEP 羧化酶磷酸化调节的酶学证据。”