スクアレン合成酵素の大腸菌における大量発現と簡便な精製法の確立 結晶化をめざして

角鲨烯合成酶在大肠杆菌中的大规模表达及以结晶为目标的简单纯化方法的建立

• 批准号: 08878085
• 负责人: 畑 信吾
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878085/
• 关键词: イネ; トウモロコシ; ダイズ; cDNAクローニング; pETシステム

すでに解析が終了した双子葉植物シロイヌナズナのスクアレン合成酵素cDNAをプローブとして、やはり双子葉植物であるダイズのほか、単子葉植物であるイネとトウモロコシからも本酵素の完全長cDNAを単離できた。塩基配列を決定した結果、単子葉植物の本酵素アミノ酸配列は、双子葉植物のものと似かよっているが少し短いことが判明した。これらのアミノ酸配列をもとに酵母からヒトに至る真核生物における本酵素の進化系統樹を描かせたところ、植物の本酵素は動物や酵母とは別個のクラスターを形成し、そのなかでも単子葉植物と双子葉植物の酵素は異なるサブグループを形成した。サザンブロッティングの結果、イネのゲノムはハプロイドあたり本酵素遺伝子を1コピー有することが明らかになった。ノーザンブロッティングの結果、イネの本酵素mRNAは細胞増殖の盛んな器官に比較的多く発現し、乾燥ストレスやアブシジン酸処理で誘導された。また、黄化葉に赤色光もしくは青色光を照射すると、光の波長にもかかわらず、mRNAレベルは低下した。(以上をまとめて日本植物生理学会1997年度年会で発表予定。また論文投稿中。)ダイズ(植物)と以前に単離していたマウス(動物)の本酵素cDNAを代表的な実験材料としてpET32システムに組込み、製造元であるNovagen社のプロトコールに従って大腸菌BL21(DE3)で発現させることを試みた。しかし現在までのところ、本酵素を高レベルで発現するには至っていない。組換え部位の塩基配列より、ベクターの構築に問題がないことは確認した。今後はさらに細かく実験条件を検討し、本酵素の大量発現と精製に結びつけたい。

In this paper, we have analyzed the synthetic enzymes of Gemini plant, cDNA, Gemini, Gemini and Gemini. The basic collocation column determines the result of the experiment, the enzyme of the plant, the acid collocation of the plant, and the activity of the Gemini plant, which is similar to that of Gemini. This enzyme is used to analyze the eukaryotic enzyme system, the plant enzyme assay, eukaryotic enzyme assay, eukaryotic enzyme enzyme assay, eukaryotic enzyme enzyme assay, eukaryotic expression system, eu You need to know the results and the results of the experiment. You need to know that this enzyme is a good candidate. In this paper, the results of the experiment, the results and the results of the enzyme. Light, yellowing, red light, cyan light, light wave length, light wavelength, mRNA light, low temperature. (the table above is based on the 1997 Annual meeting of the Plant Physiology Society of Japan. The article is being submitted.) This enzyme cDNA represents a variety of materials, such as pET32 (plant), Novagen (plant), BL21 (DE3), and so on. This enzyme (animal) is the most common material represented by this enzyme. The enzyme is not present, and the enzyme is high in temperature. The basic configuration of the part of the organization is related to the allocation of information and information on the basis of the system. In the future, the conditions are different, and a large amount of this enzyme is detected.

项目成果

T.Furumoto et al.: "Plant calcium-dependent protein kinase-related kinases(CRKs)do not require calcium for their activities" FEBS Lett.396. 147-151 (1996)

T.Furumoto 等人：“植物钙依赖性蛋白激酶相关激酶 (CRK) 的活性不需要钙”FEBS Lett.396。