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遺伝子導入法による心房性ナトリウム利尿ホルモンの分泌経路の解析

基因转移法分析心钠素分泌途径

基本信息

批准号：
07670023
负责人：
飯田弘
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

心房性Na利尿ホルモン(ANP)の分泌経路を解析するために、ANPを合成する繊維芽細胞BHK-21をまず作製した。ANPのcDNAを発現ベクターに組み込み、ネオマイシン耐性遺伝子とともにBHK-21細胞に遺伝子導入した。ネオマイシン耐性細胞をクローン化し、ANPを合成する細胞を樹立した。これらの細胞は分泌顆粒を合成しないが、ANPを合成分泌することを蛍光抗体法及びイムノブロット法によって確認した。生合成ラベル法によって遺伝子導入されたBHK-21細胞は、ANPを構成性分泌経路で培地中に分泌することを確認した。培養心房筋細胞におけるANPの非刺激的分泌経路とトランスフェクトしたBHK-21におけるANPの分泌経路を下記の2つの方法で比較検討した。1) ^<35>S-メチオニンで細胞をパルスラベルしその後のANPの分泌挙動を液体シンチレーションとフルオログラフィーにて調べた。2) 上記2種類の細胞のANP分泌に対するブレフェルディンA(BFA)の影響を調べた。これらの実験によって、心房筋細胞からのANPの非刺激的分泌はそのカイネティクスにおいてBHK-21細胞のものとは異なること、及び心房筋細胞のANP分泌はBFA非感受性であるが、BHK-21細胞からのANP分泌はBFAによって顕著に抑制されることが明らかとなった。

The secretory pathway of atrial Na diuresis (ANP) was analyzed and synthesized by ANP. The germ cell BHK-21 was used as an antiseptic. ANP cDNA shows that there is a significant increase in the number of BHK-21 cells in the system, such as tolerance, tolerance and tolerance. There is no difference between the two groups in terms of tolerance, metabolism and ANP synthesis. The cells secrete synthetic antigens, ANP synthesises and secretes antigens, photoantibodies and antigens. In the synthetic method, the seeds were inserted into the BHK-21 cells, and the ANP cells were secreted through the pathway of sexual secretion. Culture atrial tendons, cells, ANP, unstimulated secretory pathways, BHK-21 pathways, ANP secretory pathways, 2 secretory pathways. 1) after the lt;35>S- treatment, the ANP secreted a liquid that caused a lot of damage to the body. 2) the last two kinds of cell ANP secrete a large amount of protein, which has a negative effect on the expression of protein A (BFA). Atrial tendon cells, atrial tendon cells, ANP cells, unstimulated secretion, atrial tendon cells, atrial tendon cells, BHK-21 cells, atrial tendon cells,