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心房性ナトリウム利尿ホルモンのソーティング分子機構

心钠素分选分子机制

基本信息

批准号：
06670027
负责人：
飯田弘
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

心房性ナトリウム利尿ホルモン(ANP)のソーティング機構を研究するために、研究計画調書に記載したように(1)ANPと複合体を作る蛋白質の検索及び(2)分泌顆粒の膜に結合している蛋白質の分析同定を行なった。(1)培養心房筋細胞を〔^<35>S〕メチオニンでラベルした後、抗ANP抗体でANPと共に沈降してくる蛋白質をSDS-PAGE/フルオログラフィーにて分析した。その結果、いくつかの蛋白質がANPと共に沈降してきたが、超微量の為それらの蛋白質を同定するまでには至らなかった。(2)ラット心耳よりパーコール密度勾配超遠心法により分泌顆粒の分画を得、分泌顆粒の膜にassociateしている蛋白質の検索を行なった。電気流動によって蛋白を分離後ニトロセルロース膜に転写し、GTPのoverlayアッセイを行なった。その結果、分泌顆粒の膜に結合していると思われる4種類のGTP結合蛋白質が見い出された。これらの蛋白の分子量は25〜30KDaであるので、低分子量GTP結合蛋白(small G)であると思われる。分泌顆粒や分泌小胞に結合しているsmall Gはrab蛋白質と呼ばれ、小胞の輸送やターゲッティングに関与している可能性がある。RT-PCR/ノザン解析及び抗パプチド抗体を用いた免疫化学的手法によって分泌顆粒に結合しているrab蛋白質の同定を現在行なっている。

The study on the mechanism of atrial natriuretic peptide (ANP) is described in the study plan.(1) The protein analysis of ANP complex and (2) The protein analysis of membrane binding of secretory granules are carried out simultaneously. (1)After culture of atrial muscle <35>cells, anti-ANP antibodies were analyzed by SDS-PAGE/PAGE. As a result, the protein content of ANP was decreased, and the protein content of ANP was decreased. (2)The density of secretory granules is closely related to the distance between the secretory granules and the membrane, and the protein expression is closely related to the secretory granules. After the separation of the electric flux and the GTP, As a result, 4 kinds of GTP binding proteins were found in secretory granules and membrane binding proteins. The molecular weight of the protein is 25 ~ 30KDa, and the low molecular weight GTP binding protein (small G) is 25 ~ 30KDa. Secretory granules and secretory vesicles bind to small G rab proteins and transport them to vesicles. RT-PCR/PCR analysis and identification of anti-Rab proteins using immunochemical techniques