ヒト老化マーカータンパクSMP30の年齢推定への応用

人类衰老标志蛋白SMP30在年龄估计中的应用

• 批准号: 07670501
• 负责人: 木村 章彦
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670501/
• 关键词: SMP30; 老化; モノクローナル抗体; 年齢推定

ラット肝のホモジネイトから硫安分画、蔗糖濃度勾配IEF、ゲル濾過後、二次元電気泳動によりラットSMP30を、SDS-PAGEにおいてほぼ単一なバンドとして精製することができた。このラットSMP30を抗原として、ウサギに免疫し、ラットSMP30に対する十分な力価を有する抗血清を得、ハイドロキシアパタイトカラムにより精製してIgG画分とした。このIgG画分をホルミルセルロファインにカップリングしアフィニティーゲルを作製した。剖検時に採取したヒト肝のホモジネイトの硫安分画をこのアフィニティーカラムにかけ、その結合画分よりヒトSMP30をほぼ単一に精製した。ここで得られたヒトSMP30を抗原としてマウスに足底免疫し、モノクローナル抗体の作製を行ったが、十分な特異性と安定性を有するクローンを得ることはできなかった。そこで、免疫法を腹腔免疫に変更して再度モノクローナル抗体の作製を行ったが、足底免疫とほぼ同様の結果に終わった。これは、精製ヒトSMP30中に微量に存在する夾雑物の免疫原性が高く、ヒトSMP30に対するクローンの活性化を妨げるためと考えられる。そこで現在、今回抗原として用いたヒトSMP30をIEFおよび二次元電気泳動により更に精製を進め、これを抗原としてモノクローナル抗体の作製を行っており、まもなくヒトSMP30に対するモノクローナル抗体が得られるものと思われる。今後、引き続き本研究の最終的目的であるヒトにおけるSMP30を指標とする年齢推定法の確立まで研究を進める予定である。

ラット liver のホモジネイトから thiamine separation, sucrose concentration blending IEF, ゲル filtration, two-dimensional electrophoresis によりラットSMP30を、SDS-PAGEにおいてほぼ単一なバンドとしてRefined することができた.このラットSMP30をantigenとして、ウサギにimmuneし、ラットSMP30に対する十な力価を有するAntiserumを得、ハイドロキシアパタイトカラムによりRefined してIgG draw pointsとした.このIgG draw points をホルミルセルロファインにカップリングしアフィニティーゲルをproduced した. At the time of autopsy, we took the したヒト liver and the のホモジネイトのsulfur anhydride painting をこのアフィニティーThe combination of カラムにかけ and そのよりヒトSMP30 をほぼ単一に精品した. SMP30 Antigen and Antibody It is a very specific and stable product, and it is a very good product.そこで, Immunization method を Abdominal immunization に変 Update し て モノクローナル Antibody の production を row ったが, Plantar immunization とほぼ同様のRESULT にFinal わった. The presence of trace amounts in これは and purified ヒトSMP30 means that the immunogenicity of the inclusions is high. , ヒトSMP30に対するクローンのactivationを hindersげるためとtestえられる. The antigen is now and now is refined with the SMP30 IEF SMP30 two-dimensional electrophoretic electrophoresis, and the antigen is refined again.モノクローナルantibodiesの行っており、まもなくヒトSMP 30に対するモノクローナルantibodyがgetられるものと思われる. From now on, the final purpose of this study will be to establish the SMP30 index and the age estimation method, and the research will be carried out and predetermined.