膜レセプター過剰発現による自己リン酸化とシグナル伝達:c-kit過剰発現による自己リン酸化促進と赤芽球分化抑制

膜受体过表达导致的自磷酸化和信号转导：c-kit过表达促进自磷酸化并抑制红细胞分化

• 批准号: 07671197
• 负责人: 田嶌 政郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671197/
• 关键词: c-kit過剰発現; レセプター自己リン酸化; K562赤芽球分化; c-AMP; シグナル伝達

1、K562YO細胞はc-kit蛋白を膜に発現している。flow cytometoryによりその発現量を検討したところ、cyclic-AMPにより濃度依存性(1mM)及び時間依存性(72時間)に増強した。又、Western法による検討でも同様の結果が確認された。c-kit非発現K562細胞でも、cyclic-AMPにより膜c-kit蛋白発現量がcyclic-AMP非刺激時のK562YO細胞程度までは増加した。2、発現c-kitはリガンドSL factor刺激により、リガンド量に応じて自己タイロシンリン酸化を受け、レセプターとして機能していると考えられた。1mM cyclic-AMP存在下3日間培養後には、c-kit量は約10倍に増加し、自己タイロシンリン酸化が認められた。蛋白量が同程度の未処理c-kitでは、自己タイロシンリン酸化は認められなかった。3、cyclic-AMPはc-kit非発現K562細胞のヘミンによる赤芽球分化に対して促進的に作用したが、c-kit高発現K562YO細胞に対しては抑制的に作用した。又、SL刺激は、赤芽球分化に抑制的に作用した。K562YO細胞にアンチセンスc-kit DNAをtransfectしたtransK562YOのc-kit発現量及びヘミン誘導赤芽球分化に対するcyclic-AMP反応性は非発現株と同じであった。以上より、c-kit発現株と非発現株のヘミン誘導赤芽球分化におけるcyclic-AMP反応性の差異は、c-kitの発現量増加の差異及びそれに伴う自己タイロシンリン酸化の有無に関係していると考えられた。現在、homodimer形成能、下流シグナルの蛋白リン酸化について確認中である。

1. K562YO cells express c-kit protein in membrane. Flow cytometric assay showed a strong concentration-dependent (1mM) and time-dependent (72 hours) increase in emission. In addition, the Western method was used to investigate the same results. c-kit protein expression in K562 cells without cyclic-AMP stimulation increased compared with K562YO cells without cyclic-AMP stimulation. 2. C-kit release factor stimulation, release factor, release factor In the presence of 1mM cyclic-AMP, the amount of c-kit increased by about 10-fold after 3 days of culture. The protein content of the untreated c-kit is similar to that of the untreated c-kit. 3. Cyclic-AMP and c-kit can promote the differentiation of red buds in K562 cells, while c-kit can inhibit the differentiation of red buds in K562YO cells. In addition, SL stimulation inhibited the differentiation of red buds. K562YO cells contain c-kit DNA, which is transfect-induced, and cyclic-AMP, which is not transfect-induced. The differences in cyclic-AMP reactivity between c-kit and non-ckit induced red bud differentiation were related to the differences in c-kit production and the presence or absence of c-kit acidification. Now, homodimer formation ability, downflow of protein acidification, confirmation of the process.

项目成果

H. Sawai: "Requirement of AP-1 for ceramide-induced apoptosis in human・leukemia HL-60 cells" The Journal of Biological Chemistry. 270. 27326-27331 (1995)

H. Sawai：“人/白血病 HL-60 细胞中神经酰胺诱导的细胞凋亡所需的 AP-1”《生物化学杂志》270. 27326-27331 (1995)。

K. Ogawa: "High expression of c-kit in K562YO cells due to the prolonged half-life of its mRNA: the effects of modification with serine/threonine kinase signals" Blood. 85. 1496-1503 (1995)

K. Okawa：“c-kit 在 K562YO 细胞中由于其 mRNA 半衰期延长而高表达：丝氨酸/苏氨酸激酶信号修饰的影响”血液。

K. Ogawa: "Erythroid differentiation and growth inhibition of K562 cells by 2',5'-dideoxyadenosine: synergism with interferon-α" Leukemia Research. 19. 749-755 (1995)

K. Okawa：“2,5-双脱氧腺苷对 K562 细胞的红系分化和生长抑制：与干扰素-α 的协同作用”《白血病研究》19. 749-755 (1995)。