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カルパインによるGタンパク質の活性制御

钙蛋白酶对 G 蛋白活性的调节

基本信息

批准号：
07680863
负责人：
川島誠一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680863/
关键词：
カルパイン Gタンパク質アデニル酸シクラーゼ情報伝達

项目摘要

三量体GTP結合タンパク質(以下Gタンパク質)は、ホルモン・神経伝達物質・細胞増殖因子などの受容体刺激を介する情報伝達系のトランスジューサ-として機能している。その機能調節機構としては、GTP-GDP交換が古くから知られている。本研究では、新たなGタンパク質の活性調節として、Gタンパク質が存在する細胞膜直下でタンパク質を限定的に分解するプロテアーゼであるカルパインの関与を想定して、その実証を試みた。試験管内で、ラット下垂体腫瘍由来GH細胞の膜に精製したカルパインを作用させると、主としてGsαサブユニットの限定的分解が認められた。その切断部位は、エフェクターやGTPと結合するラフルドメインとGTPアーゼ活性化部位(GAP)を含むゲイルドメインをつなぐ部分であった。そこで、カルパインによるGsαの分解がGタンパク質の機能に及ぼす影響を、Gタンパク質のエフェクターであるアデニル酸シクラーゼ(以下AC)の活性、即ちcAMPの産生で検討した。その結果、カルパイン処理によりcAMPの産生量は増加し、特にGタンパク質を活性化するGTPγSやNaFの存在下で顕著であった。カルパイン処理した膜のMnCl_2(ACを直接活性化する)存在下でのcAMP産生量は未処理の膜と変わらないので、カルパインがACに直接作用しその活性を高めたのではない。このcAMP産生の亢進はカルパインの容量依存的に起こる。また、ウシ脳の膜画分を用いても同様の結果が得られた。次に、カルパインで切断されることによりACの活性化をもたらすGタンパク質を同定するため、Gsα・Giαおよびβサブユニットに対する抗体の効果を検討した。その結果、Gsαに対する抗体のみが、カルパイン処理膜におけるcAMP産生の亢進を阻害した。従って、当初の予想通り、カルパインはGsα、特に活性化状態にあるGsαに作用し、ラフルドメインとゲイルドメインの間を切り離すことにより活性化状態を持続させ、その機能、即ちACの活性化を高めると結論した。

The three-dimensional GTP binding substance (hereinafter referred to as GTP binding substance) is an information transmission system that functions as a neurotransmitter substance, a cell growth factor, and a receptor stimulus. The function adjustment mechanism of GTP-GDP exchange is changed from ancient to modern. In this study, we tried to determine the relationship between the activity regulation and the existence of new G molecules and the decomposition of G molecules directly under the cell membrane. Ptosis in the tube is caused by the membrane purification of GH cells. The cleavage site contains the GTP binding site and the GAP activation site. The decomposition of Gsα, the function and influence of Gs α, the activity of Gs α, i.e., the production of cAMP, are discussed. As a result, the amount of cAMP produced by the treatment increased, especially in the presence of GTPγS and NaF. In the presence of MnCl_2(AC direct activation), the amount of cAMP produced in the untreated membrane was higher than in the untreated membrane. The cAMP production is hyperactive and capacity-dependent. The results of the study were obtained by using the same method. In addition, the activation of the AC and the quality of the AC are also determined. The results of the antibody are discussed. As a result, Gsα can inhibit the production of cAMP due to the presence of antibodies and the presence of cAMP. In addition, the active state of the active state is maintained.