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細胞内における組織型トランスグルタミナーゼによる架橋反応産物の同定

细胞内组织型转谷氨酰胺酶交联反应产物的鉴定

基本信息

批准号：
63580134
负责人：
川島誠一
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580134/
关键词：
架橋トランスグルタミナーゼイソペプチド

项目摘要

トランスグルタミナーゼ(TG ase)により形成される架橋イソペプチド結合物(γ-グルタミル-Σ-リジン)を検出するために、この架橋物に対する抗体の作成を試みた。まず、モルモット肝臓から組織型TG aseを精製した。この酵素をCa^<2+>存在下でウシ血清アルブミン(BSA)に作用させ、架橋BSAを得た。架橋BSAを完全フロイントアジュバントと共にモルモット皮下に注射し、抗体の精製をELISA法で追跡した。ELISAに供する血清試料はBSAで稀釈して抗BSA抗体を吸収することにより、架橋物に特異的な抗体の生成を測定した。5回の免疫により抗体価はほぼ飽和したので、心臓採血により全血を得た。次に架橋物に特異的な抗体を単離するため、抗原カラムを2種類作成した。即ち、非架橋BSAをセファロースに固定化して、このカラムにより抗BSA抗体を除去した。次に、架橋BSAを固定化したカラムに架橋BSAに特異的な抗体を吸着させ、目的とする抗体を得た。この抗体と反応するタンパク質を同定するため、ラット各種組織の粗抽出液をウェスタンブロットしたところ、分子量約4.2のタンパク質が強く抗体染色された。また、分子量10万以上の複数のタンパク質も反応した。一方、SDSに不溶性な分画も、そのスミアを抗体染色したところ繊維状の物質が抗体と反応した。今後、TG aseにより架橋される可能性のあるタンパク質中にイソペプチド結合の存在を確認するために、この抗体は極めて有用な手段となると考えられる。

トランスグルタミナーゼ(TG ase) により forming される bridging イソペプチド conjugate (γ-グルタミル-Σ -リジン)を検出するために、この综合物に対するAntibodyの成をtrialみた.まず, モルモット liver 蓓から tissue type TG ase した. In the presence of このzyme Ca^<2+>, でウシSerum アルブミン (BSA) can act and bridge BSA. Bridging BSA is a complete human body that can be injected subcutaneously and the antibody is purified and can be traced by ELISA. ELISA provides serum sample, BSA dilution, anti-BSA antibody absorption, and crosslinking substance specific antibody generation and measurement. 5 times of immune test, antibody test, saturation test, and heart blood collection test, full blood test. It is made of two types of antibody するため and antigen カラムを that are specific for secondary bridge materials. That is, non-bridged BSA is immobilized, and anti-BSA antibody is removed. Secondary, bridged BSA is immobilized, bridged BSA is a specific antibody, adsorbed, and the target antibody is obtained.このantibodies and anti-antibodies するタンパク性を同定するため、ラットCrude aspirates of various tissues をウェIt is stained with a strong antibody stained by a strong anti-bacterial antibody with a molecular weight of about 4.2.また, plural のタンパク性も濜した which has a molecular weight of over 100,000. On the one hand, SDS is an insoluble material, and an antibody is stained with an antibody that is stained with a dimensional substance. From now on, TG ase bridging possibility のあるタンパク性中にイソペプチドcombination のThere is a way to confirm the existence of antibodies and a method to test the effectiveness of antibodies.