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ウシPO糖蛋白糖鎖と蛋白部分のホモフィリックな接着性の検討

牛 PO 糖蛋白糖链与蛋白质部分之间同亲粘附的检查

基本信息

批准号：
07680853
负责人：
坂本安
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Saitama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680853/
关键词：
PO蛋白ミエリン接着因子

项目摘要

ウシPO蛋白の複数のcDNAを獲得したが、完全長のcDNAを得ることは結果的にできなかった。したがって、既に保有しているラットPO蛋白を用いての実験に変更した。ラットPO cDNAを発現ベクターであるpQE31に組み込み蛋白を発現させた。しかしながら、PO蛋白の発現量は極めて少なくそれは、この蛋白自身の強い疎水性度に起因すると考えられた。したがって、研究計画にそって、制限酵素の切断部位を検索した結果。ラットPO蛋白cDNAにおいてはSau3AIとRes Iの2種類の酵素消化により疎水性ドメインそ欠損させることが可能であった。欠損部位にフレームシフトを生じさせず、さらに親水性アミノ酸を主要構成成分とするような合成遺伝子を設計し組み込んだ。発現される蛋白量は、intact cDNAの場合よりも良好であった。用いたベクターpQE31はN末端側にヒスチジンヘキサマーを導入するため、この領域と高い親和性を有するNi-NTAレジンにより、組換PO蛋白を精製した。この組換え蛋白と、ウシPO蛋白糖鎖との結合性をバイオセンサー(BIAcore)により測定したが、糖鎖-蛋白間に明瞭な結合性を検出するには至らなかった。これは、糖鎖部分の分子量が小さい事に起因すると思われ糖鎖をキャリアーに結合してから測定する等の試みを検討中である。一方、蛋白-蛋白間の結合実験において優位な結合性が見出されたことから、これに関しても注目し検討を加えている。最終的には、同種間での実験が必要であると考えられウシPO蛋白のcDNA獲得実験も続行中である。

The cDNA of the complex PO protein was obtained, and the cDNA of the complete PO protein was obtained. In addition to the above, the PO protein can also be used to improve the quality of the product. pQE31 is the first time that PO cDNA has been discovered. The amount of PO protein produced is extremely low and the water content of the protein itself is low. The results of the study were as follows: The PO protein cDNA was digested by two kinds of enzymes, Sau3AI and Res I. The main components of the hydrophilic acid in the defective part of the body are the synthetic acid and the synthetic acid. The expression of protein and intact cDNA is very good. The N-terminal side of pQE31 was purified by introducing Ni-NTA protein into the domain with high affinity. The binding properties of these protein components and their PO glycans were determined by BIAcore assay. The molecular weight of the sugar lock moiety is small and the cause of the sugar lock moiety is small and the determination of the sugar lock moiety is difficult. The binding between a protein and a protein can be seen in the optimal position. Finally, it is necessary to obtain the cDNA of PO protein.