タンパク質相互作用解析のためのブロッティング測定法の超高感度化の試み

尝试建立用于蛋白质相互作用分析的超灵敏印迹测量方法

• 批准号: 14655311
• 负责人: 加藤 滋雄
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14655311/
• 关键词: 免疫測定; メンブレンブロット法; 抗体結合リポソーム; 化学発光; リポソーム免疫測定法; ブロッテイング; PVDF膜; 化学発光測定

細胞内で発現されている未知微量タンパク質の機能を解析するプロテオーム解析においては、タンパク質間相互作用を明らかにする必要がある。発現タンパク質は二次元電気泳動等で検出されるが、これらのタンパク質のうち特定タンパク質と相互作用をするものを見い出すためには、結合定数を考慮すれば発現タンパク質検出よりもはるかに高感度の検出法が必要となる。これまでリポソームを用いることによって高感度の免疫測定が可能なことが示されてきたが、抗体結合リボソームは、シグナル検印のためリポソームを破壊することが必要であり、これによってシグナルが拡散するためプロッティング測定に利用することはできなかった。そこで、本萌芽研究ではリポソームを用いる高感度メンプレンプロット検出法の開発を目指して1.リポソームを破壊せずにシグナルを検出するためにリポソーム膜透過性のシグナル検出試薬を用い、そのシグナル物質をリポソーム内に沈澱させるか、リポソーム内のみで化学発光検出されるようにし、シグナルの拡散を防ぎ、タンパク質のプロッティング位置で明確なシグナルを検出することに成功した。2.上記リポソームを用いるメンプレンブロット法によって、従来の酵素標識抗体を用いるメンブレンプロット法と比べて、約100倍の高感度を実現でき、pgオーダーの生化学物質を、検出できることを示した。化学発光によればさらに感度を上げられる。3.膜面への微小ブロットによって、リポソームを用いる場合は高い検出感度が得られることを明らかにした。等の成果を得た。

Intracellular で 発 now さ れ て い る unknown trace タ ン パ ク qualitative analytical す の function を る プ ロ テ オ ー ム parsing に お い て は, タ ン パ ク qualitative interaction between を Ming ら か に す る necessary が あ る. 発 now タ ン パ ク qualitative は secondary yuan electric 気 swimming etc で 検 out さ れ る が, こ れ ら の タ ン パ ク qualitative の う ち specific タ ン パ ク qualitative と interaction を す る も の を see い out す た め に は, combining constant を consider す れ ば 発 now タ ン パ ク qualitative 検 out よ り も は る か に Gao Gan degrees の 検 out method が necessary と な る. こ れ ま で リ ポ ソ ー ム を with い る こ と に よ っ て Gao Gan degrees の immunoassay が may な こ と が shown さ れ て き た が, antibody combining リ ボ ソ ー ム は, シ グ ナ ル 検 printed の た め リ ポ ソ ー ム を broken 壊 す る こ と が necessary で あ り, こ れ に よ っ て シ グ ナ ル が company, scattered す る た め プ ロ ッ テ ィ ン グ determination に using す る こ と は で き な か っ Youdaoplaceholder0. そ こ で, this budding で は リ ポ ソ ー ム を with い る Gao Gan degrees メ ン プ レ ン プ ロ ッ ト 検 out method の open 発 を refers し て 1. リ ポ ソ ー ム を broken 壊 せ ず に シ グ ナ ル を 検 out す る た め に リ ポ ソ ー ム membrane permeability の シ グ ナ ル 検 out try 薬 を い, そ の シ グ ナ ル material を リ ポ ソ ー ム に precipitates within さ せ る か, リ ポ ソ ー ム の み で chemical 発 検 out light さ れ る よ う に し, シ グ ナ ル の company, scattered を ぎ, タ ン パ ク qualitative の プ ロ ッ テ ィ ン で グ position clear な シ グ ナ ル を 検 out す る こ と に successful し た. 2. Written リ ポ ソ ー ム を with い る メ ン プ レ ン ブ ロ ッ ト method に よ っ て, 従 to identify antibody を の enzyme い る メ ン ブ レ ン プ ロ ッ と ト method than べ て, about 100 times の Gao Gan degrees を be presently で き, pg オ ー ダ ー の biochemical substance を, 検 で き る こ と を shown し た. Chemical luminescence によればさらに sensitivity を げられる. 3. The membrane surface へ の tiny ブ ロ ッ ト に よ っ て, リ ポ ソ ー ム を with い る occasions は high い が 検 out sensitivity to ら れ る こ と を Ming ら か に し た. To obtain た from を.

项目成果

熊田 陽一: "Liposome immunoblotting assay utilizing as enhanced chemiluminescent reaction improved by surfactant"Journal of Chemical Engineering of Japan. 第36巻・第8号. 926-961 (2003)

Yoichi Kumada：“利用表面活性剂改进的增强化学发光反应的脂质体免疫印迹测定”日本化学工程学报第36卷，第8期.926-961(2003)。

熊田 陽一: "Liposome Immunoblotting Assay Utilizing Enhanced Chemiluminescent Reaction Improved by Surfactant"Journal of Chemical Engineering of Japan. (発表予定). (2003)

Yoichi Kumada：“利用表面活性剂改进的增强化学发光反应的脂质体免疫印迹测定”日本化学工程学报（待出版）（2003年）。