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細菌によるワックスエステル合成のための代謝工学

细菌合成蜡酯的代谢工程

基本信息

批准号：
14656040
负责人：
加藤暢夫
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1)ワックスエステル合成に関与する酵素遺伝子のクローニングn-アルカン資化性菌Acinetobacter sp.M-1株より、ワックスエステル合成の最終段階を触媒する酵素、acyl-CoA : alcohol transferaseを精製し、酵素化学的諸性質を明らかにするとともに、その推定アミノ酸配列の情報を基に、当該遺伝子をクローニングした。さらに、当該遺伝子をプラスミドpKT231に組み換えて大腸菌に形質転換し、大腸菌の無細胞抽出液中に本酵素活性を認め、本遺伝子が目的の酵素をコードしていることを確認した。2)ワックスエステル分解酵素欠損株の取得Acinetobacter sp.M-1株の無細胞抽出液中に、ワックスエステルを加水分解するエステラーゼの活性を認め、精製してN-末端および内部アミノ酸配列を決定した。これを基に当該遺伝子をクローニングした。遺伝子の組換えによってこの遺伝子破壊株を得ることは出来なかったが、通常の変異処理によりこのエステラーゼの活性を示さない変異株(et株)を得ることができた。3)代謝工学的手法によるワックスエステル合成菌株の育種et株を宿主として、これにacyl-CoA : alcohol transferase遺伝子を保持したプラスミドpKT231-WSを形質転換した。その結果、形質転換株のacyl-CoA : alcohol transferase活性は元株の約120倍の活性を示した。この株を用い、n-ヘキサデカンを炭素源とした窒素制限培地で培養することにより、ワックスエステルの蓄積量は菌体重量の37%にまで達した。これは元株の2.6倍の蓄積量である。また、元株と異なり、蓄積したワックスエステルは、n-ヘキサデカンが消費された後でもほとんど分解されることなく、安定に蓄積した。

1) Enzymes related to the synthesis of enzymes and enzymes. Acinetobacter sp. M-1 strain. Enzymes related to the final stages of enzyme synthesis. Acyl-CoA : alcohol transferase purification. Enzymes related to the chemical properties of enzymes. In addition, when the gene was extracted from pKT231, the enzyme activity in Escherichia coli was identified, and the gene activity in Escherichia coli cell-free extract was confirmed. 2) Acinetobacter sp. M-1 strain was isolated from cell-free extract of Acinetobacter sp. M-1 strain. The activity of Acinetobacter sp. M-1 was identified, purified and determined by N-terminal and internal acid alignment. This is the first time I've ever seen a child. The results show that there is no difference in the activity of different plants (et). 3)Metabolic engineering techniques for the production of synthetic strains of the breeding plant host and host, and for the maintenance of acetyl-CoA: alcohol transferase gene pKT231-WS As a result, the acyl-CoA : alcohol transferase activity of the morphologically transformed plants was about 120 times higher than that of the original plants. The amount of carbon in the culture reached 37% of the total weight of the bacteria. 2.6 times the amount of the original plant. In addition to the above, the company also has the following advantages:

项目成果

期刊论文数量（12）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

微生物の新規な代謝機能の解明とその応用に関する研究

微生物新代谢功能阐明及其应用研究

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
日本農芸化学会誌 78
影响因子：
0
作者：
^*Tateishi Y;^*Kawabe Y(^*co-first author);Chiba T;Murata S;Ichikawa K;Murayama A;Tanaka K;Baba T;Kato S;Yanagisawa J;加藤暢夫
通讯作者：
加藤暢夫

Kotani, T: "Propane monooxygenase and NAD^+-dependent secondary alcohol dehydrogenase in propane metabolism by Gordonia sp. strain TY-5"J.Bacteriol.. 185. 7120-7128 (2004)

Kotani，T：“Gordonia sp.菌株TY-5的丙烷代谢中的丙烷单加氧酶和NAD 2 -依赖性仲醇脱氢酶”J.Bacteriol.. 185. 7120-7128 (2004)

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Role of α-Methylacyl CoenzymeA Racemase in the Degradation of Methyl-Branched Alkanes by Mycobacterium sp. Strain P101.

α-甲基酰基辅酶 A 消旋酶在分枝杆菌菌株 P101 降解甲基支链烷烃中的作用。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Bacteriol. 186(21)
影响因子：
0
作者：
Yasuyoshi Sakai;Hironori Takahashi;Yuori Wakasa;Tetsuya Kotani;Hiroya Yurimoto;Nobuya Miyachi;Paul P.van Veidhoven;Nobuo Kato
通讯作者：
Nobuo Kato

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