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耐凍タンパク等の遺伝子導入による卵巣凍結保存法の創出

通过引入抗冻蛋白等基因创建卵巢冷冻保存方法

基本信息

批准号：
14656104
负责人：
宮本元
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

哺乳類の卵巣の凍結保存を実現すべく、凍結前に卵巣組織を薄切して急速に冷却・凍結しようとする手法が試みられたが、受精能をもつ卵母細胞(厳密には、哺乳類では二次卵母細胞に精子が侵入して授精が成立するので、卵子は存在しない)をほとんど得られていない。あらかじめ卵巣を摘出する前に動脈から耐凍剤を灌流した後摘出し、組織を薄切して凍結する方法が考案されたが、満足な成績が得られていない。凍結保存法が確立している精子や受精卵などの遊離細胞より格段に巨大で血管系、神経系、結合組織などに富む卵巣の凍結保存を実現するためにはブレークスルー的技術革新が必要である。極地に生息する動物の体液氷点を低下させたり氷晶表面に結合して結晶の成長を抑えて細胞破砕を阻止する耐凍タンパクの遺伝子(耐凍タンパクには化学構造の違うI、II、III型とN型糖鎖をもつタンパクがあり、IおよびIII型がクローニング済)と申請者らが見いだした細胞内アポトーシス阻止因子(cFLIP)の遺伝子クローニングベクターに組み込んで、卵巣細胞に導入し、凍害保護や細胞死阻害を実現し、雌性生殖器官の凍結保存を実現しようとしている。卵巣に耐凍性タンパク、新規アポトーシス阻害因子cFLIPと既知アポトーシス阻害因子p53を特異的に発現させる遺伝子導入法の最適化を培養細胞レベルで進めた。導入効率は高いのだがゲノムDNAに入り込む可能性の高いウイルス遺伝子を含むウイルスベクター法と併行して、ゲノムDNAに導入遺伝子が組み込まれてしまう心配のないex vivo遺伝子導入のためのリポソーム作製法の確立も進めた。

Mammalian eggs are frozen and preserved. Egg tissue is thinned before freezing. Rapid cooling. Freezing. Methods for testing and fertilization of oocytes (dense, mammalian, secondary oocyte sperm invasion and fertilization). The method of tissue thinning and freezing before and after the extraction of the egg was examined and the results were satisfactory. It is necessary to innovate the technique of freezing and preserving sperm, fertilized eggs and free cells in large vascular system, nervous system and conjunctive tissue. The body fluids of polar animals are low in temperature, and the surface of the crystals is bound to the growth of the cells.(Freeze-resistant chemical structure of type I, II, III and N-type glycans) and applicant's response to review of intracellular loss control factor (cFLIP) gene selection, introduction of egg cells, freeze protection and cell death resistance. Freezing preservation of female reproductive organs Optimization of the method for introducing the gene into cultured cells The introduction efficiency is high, and the possibility of introducing DNA into vivo is high. The method of introducing DNA into vivo is established.

项目成果

期刊论文数量（122）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Noboru Manabe: "Molecular mechanism of follicle selection in mammalian ovaries"Journal of Laboratory Animals (Kansai). 23・1. 71-78 (2002)

真锅升：“哺乳动物卵巢中卵泡选择的分子机制”实验动物杂志（关西）23・1（2002）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Noboru Manabe, Yasuyoshi Azuma, Miki Sugimoto, Kei-Ichi Sezaki, Mineko Iwahori, Satoshi Imanishi, Hanako Nishizawa, Takako Tanaka, Maki Morita, Hajime Miyamoto: "Animal Frontier Science (Sato E, Miyamoto H, Manabe Noboru eds.), In vivo and real time estim

Noboru Manabe、Yasuyoshi Azuma、Miki Sugimoto、Kei-Ichi Sezaki、Mineko Iwahori、Satoshi Imanishi、Hanako Nishizawa、Takako Tanaka、Maki Morita、Hajime Miyamoto：“动物前沿科学（佐藤 E、宫本 H、Manabe Noboru 编辑），In