耐凍蛋白遺伝子のex vivo導入による生殖器官の凍結保存

通过离体引入抗冻蛋白基因来低温保存生殖器官

• 批准号: 10876058
• 负责人: 宮本 元
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10876058/
• 关键词: 生殖器官; 凍結保存; 耐凍蛋白遺伝子; Ex vivo遺伝子導入; センダイウイルスエンベロープ蛋白; 凍害保護; アポトーシス阻害因子; HVJ-リポソーム法

生殖器官の凍結保存を実現するために、薄切組織を遊離細胞と同様に急速冷却する手法、臓器摘出に際して動脈から耐凍剤を灌流した後薄切して凍結する手法など、様々な試みが行われてきたが、受精能をもつ卵子をほとんど得られていない。遊離細胞と比較して巨大な器官を凍結保存するためには、ブレークスルー的技術革新が必要である。本研究は、極地に生息する動物の体液の氷点を低下させ、氷晶の成長を抑えて氷晶による細胞破砕を阻止する耐凍蛋白遺伝子、アポトーシス阻止因子遺伝子などを生殖器官にex vivo導入して凍害保護と細胞死抑制することで生殖器官の凍結保存を実現しようとした。遺伝子導入のためリポソーム作製法う確立し、生殖器官に導入した遺伝子を特異的に発現させるex vivo遺伝子導入法の開発を進めた。遺伝情報の伝達を担う生殖細胞に外来遺伝子が不用意に導入されることを未然に防がなくてはならないので、導入効率は高いがウイルス遺伝子を含むウイルスベクター法はとらず、ウイルス遺伝子などの混在遺伝子を含まない「リポソーム法」を開発した。すなわち、リン脂質とコレステロールからなるリポソーム膜を作製し、卵胞特異的に遺伝子を導入させるべく、標識となる卵胞特異的糖蛋白を癒合させた。さらに、細胞膜融合活性をもつエンベロープ蛋白を紫外線にて不活化したセンダイウイルス(HVJ:hemaggulutinating vieus of Japan)から調製し、リポソーム膜と癒合させた。このように調製した「HVJ-リポソーム」と標的細胞が融合してリポソーム内の遺伝子が効率よく導入・発現する系を確立した。次いで、卵胞細胞特異的レクチンをリポソームに組込んで遺伝子の組織特異的組込率を高め、high mobility group |を標的遺伝子の上流に組込んでと安定発現を計った。

Freezing and preservation of reproductive organs can be achieved by cutting tissue, free cells, rapid cooling, organ harvesting, perfusion of freeze-resistant agents, and subsequent cutting and freezing. Free cells are more important than frozen organs. This study aims to investigate the effects of freezing on the growth and development of human reproductive organs and the prevention of cell breakdown in human reproductive organs. The establishment of a method for the introduction of genes into reproductive organs, the development of a specific method for the introduction of genes into reproductive organs, and the development of a new method for the introduction of genes into reproductive organs The transmission of genetic information to germ cells is not intended to be introduced, but to prevent it from being introduced, and the introduction rate is high. The transmission of genetic information includes the introduction of genetic information into germ cells, the introduction of genetic information into germ cells, and the introduction of genetic information into germ cells. Ovum specific glycoproteins are introduced into the membrane and are labeled as healing proteins. In addition, cell membrane fusion activity is activated by ultraviolet light (HVJ). This modulation of "HVJ-detection" target cell fusion, detection of genes in the detection system is established. secondary, oocyte-specific, tissue-specific, high mobility group| The goal is to create a stable environment.

项目成果

Noboru MANABE et al.: "Endocrine-disrupting contaminants in animal products."Obstetrics and Gynaecology. 66-1. 254-265 (1999)

Noboru MANABE 等人：“动物产品中的内分泌干扰污染物。”妇产科。

Noboru Manabe et al.: "Reproductive Biology Update; Regulatory mechanisms of granulosa cell apoptosis in porcine ovarian follicle atresia." Nakanishi Pub.Co., Kyoto, Japan, 498 (1998)

Noboru Manabe 等人：“生殖生物学更新；猪卵巢卵泡闭锁中颗粒细胞凋亡的调节机制。”

Noboru MANABE et al.: "Immunochemical characteristics of a novel cell death receptor and a decoy receptor on granulosa cells of porcine ovarian follicles."Cytotechnology. 14-6. 111-121 (1999)

Noboru MANABE 等人：“猪卵巢卵泡颗粒细胞上新型细胞死亡受体和诱饵受体的免疫化学特征。”细胞技术。

Noboru Manabe et al.: "Apoptosis:Its Roles and Mechanism;Role of granulosa cell apoptosis in ovarian follicle esia." Business Center for Academic Societies,Tokyou,Japan, 228 (1998)

Noboru Manabe 等人：“细胞凋亡：其作用和机制；颗粒细胞凋亡在卵巢卵泡中的作用。”

Noboru Manabe et al.: "Selection of oocytes in mammalian ovaries." Tissue Culture Engineering. 25. 4-8 (1998)

Noboru Manabe 等人：“哺乳动物卵巢中卵母细胞的选择。”