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耐凍性タンパク質遺伝子等のexvivo導入による卵巣の凍結保存

通过离体导入抗冻蛋白基因等来冷冻保存卵巢。

基本信息

批准号：
12876061
负责人：
宮本元
金额：
$ 0.32万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12876061/
关键词：
卵巣凍結保存耐凍性タンパク質 ex vivo遺伝子導入リポゾーム細胞死受容体レクチンセンダイウイルスエンベロープタンパク質耐凍タンパク質アポトーシス受容体 Ex vivo遺伝子導入リポソーム法アポトーシス阻止因子 NIH-3T3細胞

项目摘要

これまで生殖器官の凍結保存を実現するため、凍結前に組織を薄切してより急速に冷卸しようとする手法が開発されたが、受精能をもつ卵子をほとんど得られなかった。そこで、器官摘出前に動脈から耐凍剤を灌流した後薄切して凍結する方法が考案されたが、これも満足のいく成績を得られなかった。遊離細胞より格段に巨大な器官の凍結保存を実現するためにはブレークスルー的技術革新が必要である。本研究は、極地に生息する動物の体液氷点を低下させたり氷晶表面に結合して結晶の成長を抑えて細胞破砕を阻止する耐凍タンパク質の遺伝子と申請者らが見いだしたアポトーシス阻止遺伝子を生殖器官にex vivo導入することによる凍害保護や細胞死阻害によって生殖器官の凍結保存を実現しようとするもので、下記の成果をあげた。Ex vivo遺伝子導入のためのリポソーム作製法の検討を進めた。卵巣等に耐凍性タンパク質遺伝子および申請者らが発見した新規アポトーシス阻害因子遺伝子を特異的に発現させるex vivo遺伝子導入法をマウスを用いて確立するために、遺伝子導入に際して遺伝情報の伝達を担う生殖細胞(卵子・精子)に外来遺伝子が不用意に導入されることを未然に防ぐべく、導入効率が高いがウイルス遺伝子を含むウイルスベクター法をとらず、ウイルス遺伝子を全く含まない「リポソーム法」を改良した「センダイウイルスエンベロープタンパク質と卵胞特異的レクチン組込型リポソーム」を作製した。導入遺伝子の安定発現を計るため、極地の節足動物のI型とIII型N型糖鎖耐凍タンパク質ならびに申請者の発見した新規アポトーシス阻害因子をコードするcDNAを合成し、大腸菌プラスミドに組み込んで大量に調製し、生殖器官に導入して、耐凍能の向上をみた。

The freezing and preservation of reproductive organs can be achieved by cutting and freezing tissues rapidly. Before organ harvesting, the artery was subjected to freezing and perfusion, and the method of freezing was studied. Freezing and preservation of large organs in free cells is necessary This study aims to reduce the temperature of body fluids in polar animals, to inhibit the growth of crystals on the surface of crystals, to inhibit the growth of cells, to prevent the introduction of freeze-resistant genes into reproductive organs, to prevent the introduction of freeze-resistant genes into reproductive organs, and to prevent the freezing of reproductive organs. Ex vivo gene introduction and processing method Egg and other cold tolerance factors, such as the quality of the gene and the applicant's discovery of new regulations, the prevention of damage factor gene specific development, ex vivo gene introduction method, the establishment of its use, gene introduction, the transmission of genetic information, the transmission of reproductive cells (eggs and sperm), foreign genes, unintended introduction, prevention, prevention The introduction rate is high, and the introduction rate is high. The introduction rate is high. cDNA synthesis of type I and type III N-type glycophospice resistance factors in polar arthropods, introduction of large quantities of genes into reproductive organs, and enhancement of freezing resistance.