炎症性腸疾患におけるNOD2遺伝子の役割:ノックアウトマウスの作製による検討

NOD2基因在炎症性肠病中的作用：通过敲除小鼠的产生进行研究

• 批准号: 14656122
• 负责人: 堀 正敏
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14656122/
• 关键词: 腸炎; NOD2; マクロファージ; TNFα; 自然免疫; TLR; LPS; ペプチドグリカン; Cytokine; Crohn's disease; inflammation; macrophage

NOD2はヒトクローン病や遺伝性の肉芽腫性関節炎(Blau syndrome)の病因遺伝子の1つとして報告され大きな注目を浴びている。しかも、NOD2遺伝子のSNPが、正常のヒトの4%に見られることも、本遺伝子に対する多くの研究者の興味を喚起している。NOD2は現在、感染・免疫学の分野で最も注目されている分子であるにもかかわらず、NOD2がどのような臓器・細胞に発現しているのか、その発現調節機構はどのようになっているのか、さらに下流の情報伝達系がどのようなものであるのかは、依然不明な点が多い。本研究では、NOD2の発現調節機構やその下流の情報伝達機構について検討した。まず、腸炎モデルとしてTNBS誘発腸炎マウスを作製し、粘膜と筋層でのNOD2発現について検討したところ、NOD2のmRNA発現は粘膜層で増加していることが明らかになった。さらにNODのリガンドを同定するために、マウス由来の培養マクロファージを用いて各種菌体成分によるNOD2発現について検討したところ、LPS、リポタイコ酸、ペプチドグリカンにより増加することを観察した。また、TNFα、IFNγ刺激によりNOD2の発現量が増加することを明らかにした。さらに、TNFα中和抗体投与やTNFαKOマウスから単離したマクロファージを用いてLPS刺激をしたところ、NOD2の発現量の増加は抑制されていた。他方、マクロファージにおけるNOD2の発現をRNAi法によりDown regulationしたところ、IL-1βやIL-6の発現が増加することを見いだした。すなわち、NOD2はIL-1βやIL-6発現における負の制御機構として機能している可能性が考えられた。以上の成績から、NOD2が確かに細菌の菌体成分をリガンドとして利用していることや、炎症性サイトカインのオートクライン作用によりその発現量が増加することが示唆された。また、RNAi法による解析から、NOD2がサイトカイン産生に対して負の制御機構として機能している可能性も考えられた。

NOD2 is a report on the etiology of Blau syndrome, which is a common disease. SNP in NOD2 genes, 4% of normal genes, and many researchers are interested in this gene. NOD2 is the most important molecular marker in the field of infection and immunology, NOD2 is the most important molecular marker in the field of infection and immunology, NOD2 is the most important molecular marker in the field in the field of infection and immunology, NOD2 is the most important molecular marker in the field in In this study, NOD2 discovery and regulation mechanism and downstream information transmission mechanism were discussed. The expression of NOD2 mRNA in the mucosa and muscle layer increased. NOD2 is produced in the same way as NOD2, LPS and NOD2 are produced in the same way as NOD2. TNFα and IFNγ stimulate the production of NOD2, which increases in the future. TNFα neutralizing antibodies inhibit TNFαKO production by LPS stimulation. The expression of NOD2 in other tissues was increased by RNAi. The possibility of negative control mechanism and function of NOD2 against IL-1β and IL-6 is examined. The above results show that NOD2 can be used to increase the production of bacterial components and inflammatory cells. The analysis of RNAi method and NOD2 method are related to the negative control mechanism.

项目成果

Kinoshita K, Sato K, Hori M, Ozaki H, Karaki H.: "Decrease in activity of smooth muscle L-type Ca^<2+> channels and its reversal by NF-κB inhibitors in Crohn's colitis model."Am J Physiol (Gastrointest Liver Physiol.). 285. G483-G493 (2003)

Kinoshita K、Sato K、Hori M、Ozaki H、Karaki H.：“克罗恩结肠炎模型中平滑肌 L 型 Ca^<2+> 通道活性的降低及其通过 NF-κB 抑制剂的逆转。”Am J Physiol （胃肠道肝脏生理学。）285。G483-G493（2003）。

Ozaki H, Kawai T, Won KJ, Suzuki T, Sato K, Hori M, Karaki H, Torihashi S, Ward S, Sanders KM.: "Isolation and characterization, of resident macrophages from the smooth muscle layers of murine small intestine."Neurogastroenterology and Motility.. 16. 39-5

Ozaki H、Kawai T、Won KJ、Suzuki T、Sato K、Hori M、Karaki H、Torihashi S、Ward S、Sanders KM.：“来自小鼠小肠平滑肌层的常驻巨噬细胞的分离和表征。”