細胞外マトリックス分解酵素活性の新しい組織内検出方法の確立とその応用

组织细胞外基质降解酶活性检测新方法的建立及其应用

基本信息

  • 批准号:
    14657052
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.15万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2002
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2002 至 2003
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

腹部大動脈瘤破裂7症例から採取された大動脈破裂部位(9標本)に発現する細胞外マトリサクス分解活性を検出する目的で、クマリン標識合成基質と蛍光顕微鏡を用いて観察した。新鮮大動脈組織をO.C.T.コンパウンドに包埋し、4〜6m厚の凍結切片を無蛍光スライドガラス上に貼付した後、500μMクマリン標識合成基質を添加したトリス塩酸緩衝液(0.05 M Tris-HC1,pH7.5+0.1 M NaCl+10mM CaCl_2)で凍結切片をおおった。使用した合成基質はマトリックス・メタロプロティナーゼのクマリン標識合成基質(7-methoxycoumarin-4-y1)acetyl<MOCAc)-Arg-Pro-Lys-Pro-Tyr-Ala-Nva-Trp-Mel-Lys(2,4-dinitrophenyl)(Dnp)-NH_2(NFF-2)、37℃、〜96時間インキュベーションの条件で検討した。潜在型マトリックス・メタロプロティナーゼ(MMP)の活性化剤である2mMp-aminophenylmercuric acetate (APMA)添加群も作製して検討した。併せてHE染色、Elastica van Gieson染色標本を作製した。大動脈瘤壁内でのクマリン蛍光は予想に反してほとんど検出できなかった。血腫の付着している外膜では時にクマリン蛍光を認めることがあった。次いでAPMA添加群について検討してみると、APMA添加群では9標本中4標本の大動脈内膜にクマリン蛍光を認めたが、中膜と外膜にはクマリン蛍光は認めなかった。内膜内のクマリン蛍光は内膜深部に一致して局在していた。クマリン蛍光は24時間インキュベーションではほとんど認められず、48〜72時間で蛍光強度が最高に達した。APMA非添加群でクマリン蛍光を認めなかったことは活性型MMPは大動脈瘤壁内にほとんど存在せず、MMPの大部分は潜在型で存在していることが推測された。外膜血腫内でのクマリン蛍光は血腫内の好中球に含まれる酵素によるものと思われる。
Large abdominal aneurysm rupture cases 7 か ら take さ れ た artery rupture area (9) specimens に 発 now す る extracellular マ ト リ サ ク ス decomposition activity を 検 out す る purpose で, ク マ リ ン logo synthetic substrate と 蛍 light 顕 micromirror を with い て 観 examine し た. Fresh aorta tissue を O.C.T. コ ン パ ウ ン ド に embedding し, 4 ~ 6 M thick の frozen section を no 蛍 light ス ラ イ ド ガ ラ ス on に TieFu し た, after 500 microns ク マ リ ン logo synthetic substrate を add し た ト リ ス salt acid buffer (0.05 M Tris - HC1, pH7.5 + 0.1 M NaCl + 10 mm CaCl_2)で frozen slices をおおった. Use し た synthetic substrate は マ ト リ ッ ク ス · メ タ ロ プ ロ テ ィ ナ ー ゼ の ク マ リ ン logo synthetic substrate (7 - methoxycoumarin - 4 - y1) acetyl < MOCAc) - Arg - Pro - Lys - Pro - Tyr - Ala - Nva - Trp - Mel - Lys (2, 4-d Initrophenyl) (Dnp) - NH_2 (NFF - 2), 37 ℃, ~ 96 time イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン の conditions で beg し 検 た. Potential type マ ト リ ッ ク ス · メ タ ロ プ ロ テ ィ ナ ー ゼ (MMP) の activeness tonic で あ る MMP - 2 aminophenylmercuric acetate (APMA) add group も cropping し て beg し 検 た. And せてHE staining, Elastica van Gieson staining specimens を for <s:1> た. Within the large artery wall で の ク マ リ ン 蛍 は light to think に anti し て ほ と ん ど 検 out で き な か っ た. Pay the hematoma の し て い る outer membrane で は when に ク マ リ ン 蛍 light を recognize め る こ と が あ っ た. Time い で APMA group add に つ い て beg し 検 て み る と, APMA group add で は specimens of 9 samples 4 の artery intima に ク マ リ ン 蛍 light を recognize め た が film outside, in the film と に は ク マ リ ン 蛍 light は recognize め な か っ た. In the endometrium, the <s:1> に リ 蛍 蛍 蛍 light shows that in the deep endometrium, the に is consistent with the <s:1> て た た た た. ク マ リ ン 蛍 light は 24 time イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン で は ほ と ん ど recognize め ら れ ず, 48 ~ 72 time で 蛍 light intensity が に total し た. APMA group not add で ク マ リ ン 蛍 light を recognize め な か っ た こ と は type activity of MMPS は big artery wall inside に ほ と ん ど exist せ ず exist, most MMPS の は potential で し て い る こ と が speculation さ れ た. In the epididymal hematoma, there is a で に, a <s:1>, a リ, a 蛍 light, a に, a good middle bulb, a に containing まれる enzymes, a による, a <s:1>, a と, and a われる.

项目成果

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  • 影响因子:
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    $ 1.15万
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    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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    $ 1.15万
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    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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    01570174
  • 财政年份:
    1989
  • 资助金额:
    $ 1.15万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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