細胞性担体を用いた新規腫瘍特異的遺伝子治療の開発

利用细胞载体开发新型肿瘤特异性基因疗法

• 批准号: 14657213
• 负责人: 柴田 徹
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657213/
• 关键词: 低酸素; 遺伝子治療; 細胞療法; レトロウイルスベクター

腫瘍特異的な低酸素環境において、選択的な遺伝子発現を達成するためのベクター開発に取り組んだ。ヒトVEGFの調節領域を応用した低酸素誘導性レトロウイルスベクターの作成を行った。本研究では、恒常的発現を起こす通常のものでなく、Self-inactivating typeのpSIRを選択した。得られたレトロウイルスを細胞株に感染させ、G418により選択し、得られたクローンを用いて反応性を調べた。特にヒト単球系由来のTHP-1に着目し、低酸素に対する反応とともにTPA刺激による影響をみた。18-24時間の低酸素培養により約千倍の誘導効率を示し、TPAによりさらに3-10倍の増強を認めた。この結果は単球からマクロファージへの分化刺激により低酸素誘導性遺伝子発現が増加する可能性を示している。また、癌抑制遺伝子p53は、VEGF等の低酸素依存性の遺伝子発現に対し抑制的に働くとの報告がある。我々はp53 statusの異なる種々の培養細胞にて、レポーターアッセイを行ったが一定の傾向を示さなかった。HT1080のp53が野生型および変異型のisogenic cell lineを入手し、低酸素依存性遺伝子発現に対する影響を検討した。レポーター、VEGFのNorthern blotを行った。興味深いことに、野生型に比べ、変異型のものでいずれの解析でも低酸素、有酸素下いずれにおいても遺伝子発現が低下している結果が得られた。このミスセンス変異型の蛋白は恒常的に細胞内蓄積が認められており、転写抑制効果を発揮している可能性が考えられた。次に、低酸素領域を陽性描出する試みとしてGFP発現ベクターを作成し、培養細胞Be11に導入した。FACSを用いての解析で、好気的条件では殆ど蛍光を示さないが、低酸素培養により選択的なGFP発現の増強を示す細胞株を樹立した。ヌードマウス移植腫瘍モデルにて適切な励起光と光学フィルターの利用により、非侵襲的に生体腫瘍内での緑色蛍光の描出が可能であった。このことは、腫瘍内に我々の低酸素応答性ベクターの転写活性化に十分な低い酸素分圧の組織が存在することが示された。

The special low-acid environment is very sensitive, and the selected one is now available as a result of high-level environmental pollution. In the field of low-acid, low-acid, low-acid, In this study, we usually choose the best candidates for the study, such as the Self-inactivating type pSIR. The cell lines were infected, the G418 strain was selected, and the anti-sex virus was used. The cause of the ball is THP-1, low acid, low acid, anti-acid, TPA stimulation, shadow, etc. During 18-24 hours, the low-acid culture showed a thousand-fold test rate, and the TPA test showed 3-10 times the strength of confirmation. Results the results showed that the possibility of the increase in the possibility of low-acid sexual growth was demonstrated by the induction of differentiation and stimulation of differentiation. Cancer suppressor p53, VEGF and other low-acid-dependent phenotypes have been reported for inhibition. We will use p53 status to train all kinds of cells and make sure that we can tell each other that we want to know how to do it. HT1080, p53, wild-type, wild-type, low-acid dependence, low acid dependence, low acid dependence and low acid dependence. Please contact me, VEGF please Northern blot the line. The taste is deep, the wild type is better than the wild type, and the wild type is similar to the wild type. The results show that the low acid content is low and the acid content is low. The constant intracellular storage and write-down inhibition of the protein type protein is related to the possibility of intracellular storage. In the field of low-acid and low-acid, we can see that there is a difference in the production of GFP in the field of low-acid and low-acid in the field. FACS showed that the cell line was strong when it was selected by low-acid culture, and showed that the cell line was isolated by using the GFP which was selected by low-acid culture and good conditions. The light is excited by the light source, the optical device, the light source, the light source, the color light There is a high level of activity in the tissue that is low in acid content.

项目成果

D.Vordermark, T.Shibata, J.M.Brown: "Green fluorescent protein is a suitable reporter of tumor hypoxia despite an oxygen requirement for chromophore formation"Neoplasia. 3. 527-534 (2001)

D.Vordermark、T.Shibata、J.M.Brown：“尽管发色团形成需要氧气，但绿色荧光蛋白是肿瘤缺氧的合适报告者”肿瘤。

T.Shibata, A.J.Giaccia, J.M.Brown: "Hypoxia-inducible regulation of a prodrug-activating enzyme for tumor-specific gene therapy"Neoplasia. 4. 40-48 (2002)

T.Shibata、A.J.Giaccia、J.M.Brown：“用于肿瘤特异性基因治疗的前药激活酶的缺氧诱导调节”肿瘤。

T.Shibata, A.J.Giaccia, J.M.Brown: "Development of a hypoxia-responsive vector for tumor-specific gene therapy"Gene Ther. 7. 493-498 (2000)

T.Shibata、A.J.Giaccia、J.M.Brown：“开发用于肿瘤特异性基因治疗的缺氧响应载体”Gene Ther。

Shibata, T., Giaccia, A.J., Brown, J.M.: "Hypoxia-inducible regulation of a prodrug-activatingenzymefor tumor-specific gene therapy."Neoplasia. 4. 40-48 (2002)

Shibata, T.、Giaccia, A.J.、Brown, J.M.：“用于肿瘤特异性基因治疗的前药激活酶的缺氧诱导调节。”肿瘤。

Cao, Y.J., Shibata, T., Rainov, N.G.: "Liposome-mediated transfer of the bcl-2 gene results in neuroprotection after in vivo transient focal cerebral ischemia in an animal model."Gene Ther. 9. 415-419 (2002)

Cao, Y.J.、Shibata, T.、Rainov, N.G.：“脂质体介导的 bcl-2 基因转移可在动物模型中产生体内短暂性局灶性脑缺血后产生神经保护作用。”Gene Ther。