FRETを用いたエキソサイトーシス時のリガンド、受容体の細胞内移動の解析

使用 FRET 分析胞吐过程中配体和受体的细胞内运动

• 批准号: 14657422
• 负责人: 田坂 慶一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657422/
• 关键词: FRET; Rho

蛋白質をはじめとする生体内機能分子の働きを生きた細胞内で観測する手段として、蛍光蛋白質を利用したFRET(Fluorescence energy transfer、蛍光エネルギー移動)を用いたエキソサイトーシス時のリガンド、受容体の細胞内移動動態を観察するために設定したFRETを用いたシステムの立ち上げに困難さを経験している。そこで、まず、いままでに実績のある、細胞内メッセンジャータンパク質である低分子量G蛋白のRasとRhoとおよびそのエフェクター蛋白であるRaf, PKNとの間のFRET現象の観察を試みた。細胞は我々にとって使い慣れており、かつ管理および操作が容易なCaov3(ヒト卵巣癌細胞由来細胞株)を用いた。RASにYFP(黄色蛍光色素)、RafにCFP(青色蛍光色素)を含むプラスミドを作成した。両者を一時的に発現することには成功したが、その安定的観察のためにはなんらかの科学的捜査が必要である。またFRET現象を観察するためには2分子の安定的バランスが必要である。両蛋白を同時に等量づつ発現させるために2つのプラスミドをhinge(蝶番)でつないで一つのプラスミドとして均等に発現するようシステムを開発中であるが、未だ確立に至っていない。平行してRhoにCFP、PKNにYFPをつないだプラスミドを作成し、検討も行っているが同様の問題を解決できないでいる。以上の困難さより計画自身の遂行にも困難さを来している。

Protein in vivo functional molecules in the production of intracellular detection means, light protein use FRET(Fluorescence energy transfer, light production) in the use of the FRET in the detection of intracellular movement dynamics, set the FRET in the use of the FRET in the detection of intracellular movement difficulties. A study of the FRET phenomenon between Ras and PKN in the cell The cells are easy to use and easy to manage. Caov3(a cell line derived from ovarian cancer) is used. RAS YFP(yellow fluorescent pigment), Raf CFP(cyan fluorescent pigment) are included in the list. A scientific search is necessary for the success and stability of the investigation. It is necessary to observe the FRET phenomenon and to stabilize the two molecules. If protein is detected at the same time and in the same amount, it will be detected at the same time and in the same amount. This system is currently under development and has not yet been established. Parallel to Rho CFP, PKN YFP, we can solve the same problem by creating and discussing the solution. The difficulties mentioned above are due to the difficulties in implementing the project itself.

项目成果

Geranylgeranylacetone inhibits lysphosphatidic acid-induced invasion of human ovarian cancer cells in vitro

香叶基香叶基丙酮抑制溶血磷脂酸诱导的体外人卵巢癌细胞的侵袭

• 发表时间: 2005
• 期刊: Cancer 103
• 作者: K.Hashimoto.;et al.
• 通讯作者: et al.

Nakatsuji, Y., et al.: "Epidermal growth factor enhances invasive activity of BeWo choriocarcinoma cells by inducing α2 integrin expression"Endocrine J. 50. 703-714 (2003)

Nakatsuji, Y., et al.：“表皮生长因子通过诱导 α2 整合素表达增强 BeWo 绒毛膜癌细胞的侵袭活性”Endocrine J. 50. 703-714 (2003)

Alendronate inhibits intraperitoneal dissemination in in vivo ovarian cancer model.

• DOI: 10.1158/0008-5472.540.65.2
• 发表时间: 2005-01
• 期刊: Cancer research
• 影响因子: 11.2
• 作者: Kae Hashimoto;Ken‐ichirou Morishige;Kenjiro Sawada;M. Tahara;Rikako Kawagishi;Y. Ikebuchi;M. Sakata;K. Tasaka;Y. Murata