神経幹細胞を用いた障害網膜への移植治療法の開発

开发利用神经干细胞治疗受损视网膜的移植疗法

• 批准号: 14657444
• 负责人: 吉村 長久
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657444/
• 关键词: ラット網膜; 虚血再灌流障害; 神経幹細胞; 胎児網膜組織; 細胞分化誘導

In vitro実験系胎児網膜組織との共培養によるラット海馬由来神経幹細胞の分化誘導を調べた。同幹細胞と胎生20日のラット網膜を3.0μ孔径の膜にて隔離して一週間共培養した後、免疫細胞染色、Flow cytometry、およびRT-PCRにて同細胞の分化を検討した。胎児網膜と共培養された神経幹細胞は対照に較べて細胞増殖が抑制され、成熟ニューロンおよびグリアのマーカーの有意な発現を認め、更に生後ラット網膜への移植によっては発現されないと報告されていた一部の網膜神経細胞マーカーの発現も認めた。胎児網膜組織は神経幹細胞をニューロン、グリア、および網膜神経細胞に分化誘導する拡散性因子を産生している可能性が示唆された。この研究成果は、既に論文として公表した。In vivo実験系ラット網膜に110mmHg,60分間の虚血負荷をかけ、再灌流直後に成熟ラット海馬由来神経幹細胞(AHSC)を硝子体中に注入した。経時的に眼球を摘出し、AHSCが網膜に生着するかどうかを検討した。この細胞は、β-Galを発現するため、マーカー遺伝子の発現で同定することが可能である。その結果、虚血再灌流負荷をかけない網膜にはAHSCは生着しないが、負荷をかけた網膜には生着することが明らかとなった。AHSCは、網膜神経節細胞層から、内顆粒層に分布しており、Map2ab抗体で陽性に染色された。この実験結果は、神経幹細胞を利用して網膜障害の治療を開発出来る可能性を示したものである。

In vitro, co-culture of fetal retina tissue and induction of hippocampal derived neural stem cells After co-culture with stem cells at 20 days of gestation, immunocyte staining, flow cytometry, and RT-PCR were performed on the same cells. Fetal omental co-culture of neural stem cells in response to the inhibition of cell proliferation, maturation and development of neural stem cells, and postnatal development of neural stem cells in response to reports of neural stem cell development Fetal retina tissue is responsible for the development of neural stem cells, apoptosis, and differentiation induced by retinal cells. The results of this research are as follows: In vivo, 110 mmHg was injected into the retina, 60 min after reperfusion, and mature hippocampal derived neural stem cells (AHSCs) were injected into the nitrate. When the eyeball is removed, AHSC is produced. The expression of β-Gal in these cells is consistent with the expression of β-Gal. The result is that the blood reperfusion load is reduced and the AHSC is reduced. AHSC was positive for Map2ab antibody and distributed in the cell layer and inner granular layer of retinal ganglion. The results show the possibility of developing treatments for retinal disorders using neural stem cells.

项目成果

Kaneko Y, Ichikawa M, Kurimoto Y, Ohta K, Yoshimura N.: "Neuronal differentiation of hippocampus-derived neuronal stem cells cultured in conditioned medium of embryonic rat retina."Ophthalmic Research. 35・11. 268-275 (2003)

Kaneko Y、Ichikawa M、Kurimoto Y、Ohta K、Yoshimura N.：“在胚胎大鼠视网膜条件培养基中培养的海马源性神经干细胞的神经分化”35・11（2003）。