網膜神経節細胞蛍光発色マウスの作製と網膜神経節細胞死の新たな評価系の確立

视网膜神经节细胞荧光小鼠的创建及视网膜神经节细胞死亡新评价体系的建立

• 批准号: 14657443
• 负责人: 福地 健郎
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657443/
• 关键词: retinal ganglion cell death; thy1.2; EGFP; transgenic mouse; SLO (scanning laser opthalmoscopy); 網膜神経節細胞; scanning lasar opthalmoscope(SLO)

昨年度に報告した網膜神経節細胞(RGC)特異的マーカーであるThy-1遺伝子プロモーター下に蛍光蛋白(GFP)を発現させRGCが特異的に標識されるトランスジェニック(Tg)マウスを用い、網膜神経節細胞障害モデルのひとつである虚血再灌流モデルを作製し、その眼底蛍光をScanning Laser Opthalmoscope (SLO)を用いて生体下で経時的に撮影し、その眼底蛍光輝度の変化と網膜神経節細胞死の関係を検討した。本トランスジェニックマウスを用いることで、全身麻酔下でSLOにて同一部位の網膜神経節細胞蛍光発色の経時的な撮影が可能であった。本トランスジェニックマウスに45分間の一過性虚血を負荷した。虚血解除後4日後から著明に眼底蛍光が減少し、7日後ではさらに減少した。14日後は7日後と比較して著変は認められなかった。眼底蛍光を定量的に評価するため、虚血負荷前をコントロールとしてSLO画像の蛍光輝度を計測した。蛍光輝度は虚血解除後4日後で約65%、7日後では約40%と統計学的に有意な減少を示し、それ以後14日後まで変化はなかった。また、虚血再灌流モデルにおける網膜神経節細胞の組織学的変化を定量化するため、網膜各層の細胞数を計測し、網膜神経節細胞/外顆粒細胞X100(GCL/ONL比)を算出し、網膜神経節細胞への障害の指標とした。その結果、GCL/ONL比は、虚血負荷前が4.85±0.4であったのに対し、虚血解除後4日で2.73±0.68と統計学的に有意な減少を認め(P<0.05)、7日後、14日後では1.05±0.23、1.10±0.29にまで減少した。この結果をSLO画像の蛍光輝度の減少と比較検討すると、7日以後の減少率に軽度の差が認められるものの、両者の変化には同様の傾向が認められた。以上の結果より、本トランスジェニックマウスを用いた眼底蛍光撮影は非侵襲的な新しい網膜神経節細胞死の評価法になると考えられた。

Last year, we reported that retinal ganglion cell (RGC)-specific fluorescent protein (GFP) was detected under Thy-1 gene expression. RGC-specific fluorescent protein (Tg) was detected under Thy-1 gene expression. RGC-specific fluorescent protein (Tg) was detected under Thy-1 gene expression. RGC-specific fluorescent protein (Tg) was detected under Thy-1 gene expression. To investigate the relationship between changes in retinal luminosity and retinal ganglion cell death. This is the case when the retinal ganglion cells in the same part of the body are exposed to light. This is a 45-minute period of transient hypothermia. After 4 days of blood deficiency relief, the brightness of the fundus decreased, and after 7 days, the brightness decreased. After 14 days, the comparison will be made after 7 days. Measurement of the brightness of SLO images After 4 days and 7 days, the brightness decreased by about 65% and 40% respectively. In addition, the histological changes of retinal ganglion cells during reperfusion of deficient blood were quantified, the number of cells in each layer of the retina was measured, and the ratio of retinal ganglion cells to outer granular cells X100(GCL/ONL ratio) was calculated, which is an indicator of damage to the retinal ganglion cells. GCL/ONL ratio decreased significantly from 4.85±0.4 days before hypoxemia to 2.73±0.68 days after hypoxemia (P<0.05), from 1.05±0.23 days after hypoxemia to 1.10±0.29 days after hypoxemia. The results show that the decrease in the brightness of SLO images is relatively small, and the difference in the reduction rate after 7 days is relatively small. The above results show that the fundus photography is a new method for evaluating retinal ganglion cell death.

项目成果

Masaaki Seki: "Establishment of a Novel Enzyme-linked Immunosorbant Assay for Thy-1 ; Quantitative Assessment of Neuronal Degeneration"Neuroscience Letters. 329. 185-188 (2002)

Masaaki Seki：“针对 Thy-1 的新型酶联免疫吸附测定的建立；神经元变性的定量评估”神经科学快报。