モデル動物を用いたRNAiによる遺伝子機能解析法の確立と神経難病研究への応用

模型动物RNAi基因功能分析方法的建立及其在疑难神经疾病研究中的应用

• 批准号: 14658253
• 负责人: 大迫 俊二
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658253/
• 关键词: RNAi; ショウジョウバエ; ポストゲノム; 神経難病; 遺伝子機能; 神経発生; hairy; トランスジェニック

ポストゲノム時代を迎え遺伝子情報を最大限に生かし任意の遺伝子の機能を明らかにするために、ショウジョウバエをモデル動物としてトランスジェニックRNAiを利用した遺伝子機能解析法の確立を試みた。GAL4/UASシステムを利用するために、UASプロモーター下流に目的の遺伝子の逆位リピート(IR)またはintron-spliced IRを組み込み、或いは二つのUASプロモーターの間に目的の遺伝子を挿入したもの作製し、トランスジェニック・フライを作製した。テストケースとしてhairy遺伝子に対する効果を指標にRNAiの効果を比較検討した。hairy遺伝子は胚発生の分節化と成体の神経発生を負に制御することが知られている。hairy-GAL4ラインと掛け合わせて、IRからヘアピンdsRNAを発現させた場合は、成体のhairyに対する効果は弱くライン間でのばらつきがみられたが、UASプロモーター間にhairy遺伝子の一部を組み込んだものを使った場合は、多くのラインでh^1にみられるような過剰の感覚毛が生じた。intron-spliced IRの場合は、hairy-GAL4ラインと掛け合わせるとその多くは蛹期に致死となったが、成虫になったものはscutellum以外は比較的弱い表現型を示した。発現が強く全体に発現するtubP-GAL4と掛け合わせると、100%蛹期または3齢期で致死となった。しかし、いずれの場合も胚発生の分節化の欠損は見られなかった。RNAi効果の強かったintron-spliced IRを用いて、神経難病原因遺伝子として注目されているtauについて調べた結果、強いGAL4ラインと掛け合わせによって蛹期致死となることが判った。現在、その原因について解析を続けている。

To establish the method of analyzing the function of any gene, we should set up a new method of analyzing the function of any gene. GAL4/UAS is used to control the reverse position of the downstream target's transmission (IR). The IR is composed of two sets of UAS transmission (IR). The results of the study were compared with those of the previous study. Hairy DNA is responsible for the development and segmentation of embryos and the development of adult neurons. Hairy-GAL4: The combination of IR and dsRNA occurs when adult hairy-related effects occur, and when a portion of hairy-related effects occur, the combination of IR and dsRNA occurs when adult hairy-related effects occur when multiple hairy-related effects occur. In the case of intron-splicated IR, hairy-GAL4 is the weakest phenotype in comparison with that in the case of adult and pupae. All of them appear to be tubP-GAL4, 100% of them are fatal. In case of failure, it is necessary to develop segmentation and failure. RNAi effect is strong, intron-spliced IR, neurologic disease cause, attention, tau, modulation result, strong GAL4, connection, pupa death, etc. Now, the reason for this is to analyze it.

项目成果

Takamatsu, Y.et al.: "Characterization of the dCaMKII-GAL4 driver line whose expression is controlled by the Drosophila Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein Kinase II promoter"Cell Tissue Research. 310. 237-252 (2002)

Takamatsu, Y.et al.：“dCaMKII-GAL4 驱动系的表征，其表达受果蝇 Ca^2/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 启动子控制”细胞组织研究。

Ohsako, S., Takamatsu, Y: "Transgenic RNA interference in Drosophila"Neurochemcal Research. (in press). (2003)

Ohsako, S.、Takamatsu, Y：“果蝇中的转基因 RNA 干扰”神经化学研究。

Takamatsu Y, Kishimoto, Y., Ohsako, S.: "Immunohistochemical study of Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase II in the Drosophila brain using a specific monoclonal antibody"Brain Research. (in press). (2003)

Takamatsu Y、Kishimoto, Y.、Ohsako, S.：“使用特定单克隆抗体对果蝇大脑中 Ca^2/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 进行免疫组织化学研究”大脑研究。