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神経可塑性におけるCaMキナーゼIIリン酸化カスケードの分子遺伝学的解析

CaM激酶II磷酸化级联在神经可塑性中的分子遗传学分析

基本信息

批准号：
08270243
负责人：
大迫俊二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute for Neuroscience
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)ショウジョウバエのCaMキナーゼII遺伝子5'上流領域をlac Z遺伝子に繋いだコンストラクトを導入し、脳神経系特異的なCaMキナーゼII本来の発現パターンを示すトランスジェニックフライを作製した。この解析により、CaMキナーゼIIの脳神経系特異的な発現に必要な調節領域は、転写開始点から500塩基対までにあると考えられた。この領域についてショウジョウバエの株細胞を用いたルシフェラーゼ・アッセイを行い、転写開始点の上流約100塩基対付近に、欠失によって転写活性が著しく低下する領域があることを見い出した。この結果から、CaMキナーゼII転写調節に必須なシスエレメントのひとつがこの領域に存在するものと考えられた。2)CaMキナーゼIIの本来の発現パターンを示すトランスジェニックフライを用いた発現パターンの解析の結果、幼虫期の脳において、脳高次機能の中枢と考えられるキノコ体付近に、lacZ遺伝子の発現を局在させる調節領域があることを見い出した。3)遺伝子導入の過程で、脳高次機能の中枢として知られるキノコ体に特異的な遺伝子発現を示す2系統のエンハンサー・トラップ系統を樹立することができた。4)2種のショウジョウバエ、D.melanogasterとD.virilisのCaMキナーゼIIゲノムDNAをPCR法により単離した。両者の塩基配列を比較し、転写開始点下流にも複数の進化上よく保存された塩基配列モチーフがあることを明らかにした。今後さらにゲノムの比較により明らかとなった配列をそれぞれ単独で欠失させたときの影響を個体レベルで解析し、CaMキナーゼIIの脳神経系特異的発現の転写制御機構の全貌を明らかにするとともに、キノコ体に特異的な発現を示す遺伝子の解析を通じ、神経可塑性の分子機構を解明する新たな手掛かりを得たいと考えている。

1) The CaM II gene 5'upstream domain is lac Z gene, which is introduced into the CaM II gene and is specific to the nervous system. The analysis of this problem, CaM II, is based on the analysis of the necessary regulatory areas for the occurrence of specific neurological problems. This domain contains all the cells in the plant, and the upstream of the writing start point is about 100 μ m. The upstream of the writing start point is about 100 μ m. The upstream of the writing start point is about 100 μ m. The results of this study are as follows: 2)CaM II's natural occurrence and development is shown in the analysis results of the occurrence and development of CaM II, larval stage, and higher-order functions of CaM II. 3)The process of gene introduction, the central function of high-order gene expression, and the establishment of a system of gene expression. 4)2 The DNA of D.melanogaster and D.virilis was isolated by PCR. The basic arrangement of the two groups is compared, and the starting point of the two groups is changed. In the future, the comparison between the two groups will be made, and the effects of the two groups will be analyzed. The overall picture of the control mechanism of the specific occurrence of the brain system will be made clear, and the molecular mechanism of the brain plasticity will be explained.