Rickettsia japonicaのゲノム解析

日本立克次体基因组分析

• 批准号: 04670275
• 负责人: 内田 孝宏
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670275/
• 关键词: Rickettsia japonica; 紅斑熱群リケッチア; リケッチア表面抗原蛋白遺伝子; PCR; RFLP(制限断方長多型)

1)Rickettsia japonicaのゲノム解析を行う目的で、リケッチア粒子をパーコール密度勾配遠心により精製し、フェノール法でゲノムDNAを抽出した。R.rickettsii 190KDa表面抗原蛋白遺伝子の紅斑熱群リケッチア共通プライマーを用い、PCR法によりDNA増幅を検討した。その結果、R.japonicaのゲノムDNAはR.rickettsii、R.conorii、R.sibiricaのDNAと同様に増幅された。R.australis、R.akariのDNAは増幅されなかった。制限酵素による切断片長多型(RFLP)を検討すると、制限酵素AfaIはR.japonicaの増幅DNAを切断せず、他の病原性リケッチアと相違した。制限酵素PstIはR.japonicaの増幅DNAを275‐bp、158‐bp、120‐bpの3片に切断した。PCR/RFLPは他の病原性リケッチアと異なり、容易にR.japonicaを鑑別できた。本成績は、R.japonicaのゲノタイプ上の差異を示すものである。2)ゲノムDNA断片を組み込んだ組換えλgt11をE.coli Y1090で増殖して、ファージDNAをフェノール法で抽出した。これをテンペレートとして、R.rickettsii 190kDa表面抗原蛋白遺伝子のプライマーを用い、PCR法によりDNAの増幅を試みた。その結果、DNAの増幅が確認された。即ち、190kDa相同の抗原遺伝子をクローニングできたことを示している。ビオチン標識のdUTPを基質として増幅DNAを作成し、これをプローブとして、現在、表面抗原蛋白遺伝子を組み込んだ組換えファージを選択中である。3)R.japonica 120kDa表面抗原蛋白を分離し、家兎を免疫して抗体を作成し、組換えファージの発現蛋白を検討中である。

1)Rickettsia japonica's molecular analysis is aimed at extracting DNA from particles and molecules. R.rickettsii 190KDa surface antigen protein gene of red spot fever group, PCR method for DNA amplification As a result, R.japonica DNA is the same as R.rickettsii, R.conorii and R.sibirica DNA. R.australis, R.akari DNA amplification. Restriction enzyme RFLP analysis, restriction enzyme AfaI, R.japonica amplification DNA fragmentation, and other pathogenic mutations The restriction enzyme PstI cuts three fragments of amplified DNA from R.japonica at 275-bp, 158-bp, and 120-bp. PCR/RFLP can easily identify R.japonica. The difference between R.japonica and R.japonica is shown in this paper. 2) DNA fragments were extracted from E.coli Y1090 by DNA sequencing. The DNA amplification of R.rickettsii 190kDa surface antigen protein was tested by PCR. Results, DNA amplification and confirmation. That is, 190kDa identical antigen fragments can be found in the genome. The expression of DNA in the DNA matrix was determined by DNA sequencing. 3)R.japonica 120kDa surface antigen protein isolation, home immunity, antibody preparation, assembly, protein development, and research.