わが国の紅斑熱群リケッチア構成蛋白の遺伝子解析と病原学的早期診断法への応用

日本斑疹热群立克次体组成蛋白的遗传分析及其在病理早期诊断方法中的应用

• 批准号: 05857054
• 负责人: 丹下 宜紀
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857054/
• 关键词: 紅斑熱群リケッチア; 分子生物学; restriction fragment length polymorphism; PCR法

1984年以来、紅斑熱群リケッチア症は、わが国にも存在することが明らかになった。私どもは、先に、計4株の病原リケッチアを分離し、モノクローナル抗体による研究から、本症の病原体が、新たな病原リケッチアである可能性を報告した。本研究では、紅斑熱群リケッチア特異蛋白である190kDa蛋白の遺伝子に着目し、分子生物学的手法を用い、その独立性を解析するとともに、PCR法を利用した病原学的早期診断法の確立を目的とした。1.R.rickettsiiの190kDa蛋白遺伝子からプライマーを作製し、R.rickettsii DNAを鋳型としたPCRを行い、その遺伝子産物(324bp)をプローブとした。わが国の4分離株(片山、三坂、阿部、児嶋)と世界各地の紅斑熱群リケッチアのDNAを各種制限酵素で切断後、サザンブロットにより、restriction fragment length polymorphism(RFLP)の解析を行った。Pst Iで切断した場合、4分離株は4.5kb、R.rickettsiiは4.1kb、R.sibiricaは3.5kbにバンドを認め、HincIIでは、4分離株は15.7kb、R.rickettsiiは11.6、22、0.7kbの3本の3本のバンド、R.sibiricaは19.3kbにバンドを認めた。R.australisでは、バンドは認められなかった。さらに、わが国の4分離株は、他の10種類の制限酵素で切断しRFLPの解析を行った場合にも、同一のパターンを示した。以上の所見より、190kDa蛋白をコードしている遺伝子の構成は、わが国の4株では同一であるが、それらは世界の他の紅斑熱群リケッチアとは相違がみられることから、わが国の分離株の独立性が確認された。2.R.rickettsiiの17kDa蛋白遺伝子からプライマーを作製し、わが国の4株と他の紅斑熱群リケッチアDNAを鋳型としてPCRを行うと、246bpの遺伝子産物が認められた。急性期患者血液よりDNAを抽出し、30サイクルのPCRを2回施行すると、246bpの遺伝子産物が認められ、急性期病原診断におけるPCR法の有用性が示された。

Since 1984, the red spot fever group has been in existence. 4 strains of the pathogen were isolated, and the possibility of isolation of the new pathogen was reported. The aim of this study is to establish an early diagnostic method for red spot fever by using molecular biological methods and independent analysis. 1. The 190kDa protein fragment of R. rickettsii was amplified by PCR, and the fragment product (324bp) was amplified by PCR. 4 isolates from China (Katayama, Misaka, Abe, and Kojima) were analyzed by restriction fragment length polymorphism(RFLP) after DNA cleavage by various restriction enzymes. Pst I, R.rickettsii, R. sibirica, HincII, 4, 15.7 kb, R. rickettsii, 11.6, 22, 0.7 kb, 3, 19.3 kb, respectively. R.australis The four isolates were analyzed by RFLP for 10 kinds of restriction enzymes. The composition of the 190kDa protein in the above four isolates was confirmed to be the same as that in the other red spot fever groups in the world. 2. The 17kDa protein fragment of R. rickettsii was amplified by PCR and the 246bp protein fragment was identified by PCR. The usefulness of PCR in acute phase pathogen diagnosis was demonstrated by DNA extraction, 30-bp PCR, 2-cycle PCR, 246-bp gene product identification and acute phase pathogen diagnosis.

项目成果

丹下宜紀: "感染症の変貌5.リケッチア感染症の変貌-つつが虫病と紅斑熱-" 日本内科学会雑誌. 82. 1461-1465 (1993)

丹下义典：“传染病的转化5.立克次体感染的变化-恙虫病和斑疹热”日本内科医学会杂志82。1461-1465（1993）。