わが国の紅斑熱群リケッチア構成蛋白の遺伝子解析と病原学的早期診断法への応用

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1984年以来、紅斑熱群リケッチア症は、わが国にも存在することが明らかになった。私どもは、先に、計4株の病原リケッチアを分離し、モノクローナル抗体による研究から、本症の病原体が、新たな病原リケッチアである可能性を報告した。本研究では、紅斑熱群リケッチア特異蛋白である190kDa蛋白の遺伝子に着目し、分子生物学的手法を用い、その独立性を解析するとともに、PCR法を利用した病原学的早期診断法の確立を目的とした。1.R.rickettsiiの190kDa蛋白遺伝子からプライマーを作製し、R.rickettsii DNAを鋳型としたPCRを行い、その遺伝子産物(324bp)をプローブとした。わが国の4分離株(片山、三坂、阿部、児嶋)と世界各地の紅斑熱群リケッチアのDNAを各種制限酵素で切断後、サザンブロットにより、restriction fragment length polymorphism(RFLP)の解析を行った。Pst Iで切断した場合、4分離株は4.5kb、R.rickettsiiは4.1kb、R.sibiricaは3.5kbにバンドを認め、HincIIでは、4分離株は15.7kb、R.rickettsiiは11.6、22、0.7kbの3本の3本のバンド、R.sibiricaは19.3kbにバンドを認めた。R.australisでは、バンドは認められなかった。さらに、わが国の4分離株は、他の10種類の制限酵素で切断しRFLPの解析を行った場合にも、同一のパターンを示した。以上の所見より、190kDa蛋白をコードしている遺伝子の構成は、わが国の4株では同一であるが、それらは世界の他の紅斑熱群リケッチアとは相違がみられることから、わが国の分離株の独立性が確認された。2.R.rickettsiiの17kDa蛋白遺伝子からプライマーを作製し、わが国の4株と他の紅斑熱群リケッチアDNAを鋳型としてPCRを行うと、246bpの遺伝子産物が認められた。急性期患者血液よりDNAを抽出し、30サイクルのPCRを2回施行すると、246bpの遺伝子産物が認められ、急性期病原診断におけるPCR法の有用性が示された。