Rickettsia japonica主要抗原遺伝子の解析

日本立克次体主要抗原基因分析

• 批准号: 06670332
• 负责人: 内田 孝宏
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670332/
• 关键词: Rickettsia japonica; 紅斑熱群リケッチア; 遺伝子鑑別; 表面抗原遺伝子; PCR; 制限断片長多型(RFLP); 媒介節足動物

1.四国東南部に発生した発疹性熱性疾患の患者から分離した新種の紅斑熱群リケッチアのRickettsia japonicaについて、表面抗原遺伝子の塩基配列より推定される制限酵素を用い遺伝子型鑑別を可能にした。R.japonica DNAをR.rickettsii 190-kDa表面抗原遺伝子のプライマーRr190.70p:Rr190.602nを用いてPCR法により増幅し、M13mp19 RFのEcoRI部位でクローニングを行い、非放射性ケミルミネッセントDNAシークエンシングにより増幅産物の塩基配列を決定した。PCR増幅DNAは533bpであり、プライマー間の491bpにはR.rickettsiiの対応する領域と比較して35塩基置換があり、プライマー対には夫々1及び2塩基の置換がある。PCR増幅領域全体では、これらのリケッチア間に構成塩基について93%相同、アミノ酸では85%相同である。R.japonica増幅DNAの塩基配列を認識する制限酵素を選び、制限断片長多型(RFLP)を調べると、認識部位に塩基置換のあるPstI、AluI、MunI、HinfIではR.Japonicaの識別は可能である。塩基置換のないAvaII、HindIII、TaqI、MspIでは、R.rickettsiiを始め他の紅斑熱群リケッチアとの識別は不能である。2.R.japonica感染患者血清は、R.japonicaは勿論R.typhiとも反応する。Western blot法により、120-kDa表面抗原蛋白質に交差抗原性の存在することが知られた。患者血清によってはリポ多糖抗原と交差反応を示す場合がある。R.japonica 120-kDa表面抗原遺伝子の塩基配列には、R.typhiの同一遺伝子の塩基配列に極めて類似の領域が存在する。3.本研究で開発したPCR/RFLP法を用い、紅斑熱患者多発地の室戸地方において採集したフタトゲチマダニを調べたところ、R.japonicaゲノムDNAの存在が確認され、R.japonicaの媒介節足動物であると推定された。

1. A new type of erythematous fever group, Rickettsia, has been isolated from patients with exanthematous febrile diseases in the southeastern part of Shikoku. japonica について, surface antigen genetic 伝子の塩塩array より presumed される restriction enzyme を い缝子type identification を にした. R.japonica DNAをR.rickettsii 190-kDa surface antigen gene のプライマーRr190.70p:Rr190.602nいてPCR methodによりincreasing amplitudeし,M13mp19 RF's EcoRI parts are non-radioactive and non-radioactive The basic arrangement of the DNA amplification product is determined based on the DNA sequence. PCR amplification DNAは533bpであり、プライマーの491bpにはR.rickettsii The field of の対応する is compared with して35塩塩综合があり, プライマー対には夫々1 and び2塩塩の综合がある. The overall PCR amplification area is 93% identical, and the これらのリケッチアに について is 93% identical, and the アミノ acid では is 85% identical. R.japonica amplified DNA base array recognition, restriction enzyme selection, restriction fragment length polytype (RFLP) regulation, recognition It is possible to identify the location of R.Japonica by replacing PstI, AluI, MunI, and HinfI with base substitution. The base replacement of AvaII, HindIII, TaqI, MspI, R.rickettsii, the beginning of R.rickettsii, the erythema group, the recognition of the erythema group, cannot be done. 2. The serum of patients infected with R.japonica and R.japonica, regardless of R.typhi, are resistant to infection. Western blot method is used to detect the presence of 120-kDa surface antigen protein and its cross-linked antigenicity. The patient's serum polysaccharide antigen and cross-reaction showed that the situation was correct. The 120-kDa surface antigen of R.japonica has the same genetic structure, and the same genetic structure of R.typhi exists in a very similar field. 3. In this study, the PCR/RFLP method was used, and the collection and adjustment of the indoor and outdoor areas where patients with erythema fever are common were carried out.ところ, R.japonica DNA's existence is confirmed, R.japonica's vector arthropod is presumed.

项目成果

Yansheng Yan: "Nucleotide sequence of polymerase chain reaction product amplified from Rickettsia japonica DNA" Microbiology and Immunology. 38. 865-869 (1994)

Yansheng Yan：“从日本立克次体DNA扩增的聚合酶链反应产物的核苷酸序列”微生物学和免疫学。

Takahiro Uchida: "Detection of Rickettsia japonica in Haemaphysalis longicornis ticks by the restriction fragment length polymorphism" Journal of Clinical Microbiology. (発表予定). (1995)

Takahiro Uchida：“通过限制性片段长度多态性检测长角血蜱中的日本立克次体”《临床微生物学杂志》（即将出版）。